Ο ζωμός για την απομόνωση εντερόκοκκων (ζωμός εντερόκοκκου) είναι ένα μέσο εμπλουτισμού για την απομόνωση εντερόκοκκων από δείγματα που περιέχουν πολυάριθμη συνοδευτική μικροχλωρίδα. Πολλοί μικροοργανισμοί, όπως η σαπροφυτική Neisseria, οι σταφυλόκοκκοι, οι αιμόφιλοι, οι μη αιμολυτικοί στρεπτόκοκκοι και ορισμένα εντεροβακτήρια, αναστέλλονται πλήρως ή μερικώς.
Η καζεΐνη και οι πεπτόνες σόγιας είναι πηγές θρεπτικών συστατικών απαραίτητων για την ανάπτυξη μικροοργανισμών. Η δεξτρόζη είναι ένας ζυμώσιμος υδατάνθρακας, πηγή άνθρακα και ενέργειας. Το χλωριούχο νάτριο διατηρεί την οσμωτική ισορροπία. Το κιτρικό νάτριο είναι μια πρόσθετη πηγή άνθρακα. Το αζίδιο του νατρίου είναι αναστολέας. Το θειώδες νάτριο, όταν ανάγεται, σχηματίζει H2S. Η L-κυστίνη μειώνει το δυναμικό οξειδοαναγωγής αφαιρώντας το οξυγόνο, διατηρώντας μια χαμηλή τιμή Eh. Το Crystal violet είναι δείκτης pH.
Εμβολιάστε και επωάστε για 18-24 ώρες στους 35°C σε κανονική ατμόσφαιρα. Η ανάπτυξη των εντερόκοκκων καθορίζεται από το σχηματισμό ενός κοκκώδους ιζήματος στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα και το υγρό από πάνω του είναι χωρίς ίζημα ή ελαφρώς θολό. Σε αυτό το στάδιο, πραγματοποιείται χρώση κατά Gram και ραβδώσεις σε πλακίδια αίματος (άγαρ σόγιας τρυπτικάσεϊνης (Αρ. κατ. 1068) ή βάση άγαρ αίματος (αρ. κατ. 1108)) για να προσδιοριστεί ο τύπος αιμόλυσης και να απομονωθούν καθαρές καλλιέργειες. Για να διαφοροποιήσετε τους στρεπτόκοκκους και τους πνευμονιόκοκκους, τοποθετήστε δίσκους βακιτρακίνης και οπτοχίνης στην εμβολιασμένη περιοχή σε πλάκες με άγαρ αίματος και επωάστε υπό τις συνιστώμενες συνθήκες για 18–24 ώρες στους 35±2°C.
Πραγματοποιήστε χρώση κατά Gram, δοκιμή καταλάσης και δοκιμασία διαλυτότητας χολής σε αντιπροσωπευτικές αποικίες που λαμβάνονται από πλάκες άγαρ αίματος ή καλλιέργεια ζωμού.
Η παρουσία αλυσίδων θετικών κατά Gram κόκκων μεταβλητού μήκους, που αναστέλλονται από χαμηλές συγκεντρώσεις βακιτρακίνης, αρνητικές για καταλάση και αδιάλυτες σε χολικά ή χολικά άλατα, είναι μια προκαταρκτική αναγνώριση των βήτα-αιμολυτικών στρεπτόκοκκων της ομάδας Α. Η οριστική ταυτοποίηση των στρεπτόκοκκων μπορεί να είναι επιτυγχάνεται χρησιμοποιώντας άλλες βιοχημικές δοκιμές όπως υδρόλυση εσκουλίνης, υδρόλυση πυροσταφυλικού κ.λπ. Επιπλέον, ο ορολογικός προσδιορισμός μπορεί να πραγματοποιηθεί χρησιμοποιώντας μεθόδους αντιορού Lancefield ή τις πιο παραδοσιακές μεθόδους πήξης Edwards και Larson.
Μικροβιολογική εξέταση
Τα ακόλουθα αποτελέσματα ελήφθησαν χρησιμοποιώντας το μέσο σε καλλιέργειες δοκιμής μετά από επώαση στους 35±2°C και παρατηρήθηκαν μετά από 18-24 ώρες.
|
Μικροοργανισμοί |
|
|
Escherichia coli ATCC 25922 |
Κομπλεξικός |
|
Enterococcus faecalis ATCC 19433 |
|
|
Enterococcus faecium ATCC 27270 |
Bolton Selective Broth Base -
ΜπόλτονΖωμός Επιλεκτικού Εμπλουτισμού (Βάση) για μικροβιολογία
Γάτα. Νο 1.00068.0500
Συσκευασία - 500 g
Επιλεκτικός ζωμός εμπλουτισμού Bolton για ανίχνευσηCampylobacter
Λειτουργική αρχή
Το Bolton Selective Broth περιέχει ΘΡΕΠΤΙΚΕΣ ουσιες, που βοηθούν στην αναγνώριση ακόμη και κατεστραμμένων κυττάρων Campylobacter. Δεν απαιτείται η δημιουργία μικροαεροφιλικών συνθηκών. Η εισαγωγή ενός εκλεκτικού πρόσθετου στο μέσο αναστέλλει την ανάπτυξη της συνοδευτικής gram-θετικής και gram-αρνητικής μικροχλωρίδας.
Σύνθεση (g/l)
πεπτόνη κρέατος 10,0; υδρόλυση λακταλβουμίνης 5.0; εκχύλισμα μαγιάς 5,0; χλωριούχο νάτριο 5,0; κετογλουταρικό οξύ 1,0; πυροσταφυλικό νάτριο 0,5; διθειώδες νάτριο 0,5; ανθρακικό νάτριο 0,6; αιμίνη 0,01.
Παρασκευή
Διαλύουμε 13,8 g σε 500 ml απεσταγμένο νερό. Αποστείλουμε σε αυτόκλειστο για 15 λεπτά στους 121°C και ψύχουμε στους 45°C. Προσθέστε άσηπτα 25 ml λυμένου αίματος αλόγου και το περιεχόμενο 1 φιάλης εκλεκτικού συμπληρώματος Μπόλτον Ζωμός Εκλεκτικός Συμπλήρωμα (Γάτα.Ν 1.00079.0001) στον ζωμό Μπόλτον. Ανακατεύουμε καλά και ρίχνουμε τον ζωμό σε αποστειρωμένα μπουκάλια με βιδωτά καπάκια. Μετά την προσθήκη του δείγματος, θα πρέπει να υπάρχει απόσταση περίπου 2 cm μεταξύ του βιδωτού καπακιού και του επιπέδου του ζωμού.
ρΗ 7,4 ± 0,2 στους 25°C.
Το παρασκευασμένο υλικό στο φιαλίδιο έχει σκούρο κόκκινο ή σχεδόν μαύρο χρώμα.
Διενέργεια ανάλυσης
Αναμείξτε 25 g δείγματος σε 225 ml εκλεκτικού ζωμού Bolton και επωάστε για 4 ώρες στους 37°C.
Στη συνέχεια συνεχίστε την επώαση σε θερμοκρασία 41,5°C για 14-44 ώρες.
Υποκαλλιέργεια μετά από 18 ώρες και 48 ώρες, αντίστοιχα, σε Campylobacter Blood Free Selective Agar (Κατ. Αρ. 1.00070.0500), το οποίο δεν περιέχει αίμα.
Άμεσος έλεγχος για Campylobacter jejuniΚαι ντοoliπραγματοποιούνται με γρήγορες δοκιμές Singlepath® Campylobacter(Αρ. Κατ. 1.04143.0001).
Ελεγχος ποιότητας.
Βάση ζωμού εμπλουτισμού Bolton
Σκοπός
Υγρό μέσο καλλιέργειας που χρησιμοποιείται για απομόνωση Campylobacterαπό δείγματα τροφίμων, σύμφωνα με τα πρότυπα ISO 10272-1:2006.
Περιγραφή
Το Bolton Broth Base είναι ένας εμπλουτιστικός ζωμός για Campylobacterαπό δείγματα τροφίμων. Κατά την επεξεργασία και αποθήκευση προϊόντων διατροφής, κύτταρα Campylobacterκατεστραμμένα, η αναπαραγωγή και η ανάπτυξή τους μπορεί να διεγερθεί με διπλή επώαση σε ζωμό Bolton.
Το νερό πεπτόνης κρέατος και η υδρόλυση λακταλβουμίνης είναι πηγές άνθρακα και αζώτου που είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη. Το χλωριούχο νάτριο παρέχει οσμωτική ισορροπία και το ανθρακικό νάτριο εξουδετερώνει το οξύ που σχηματίζεται κατά την ανάπτυξη των μικροοργανισμών. Το εκχύλισμα ζύμης και το κετογλουταρικό οξύ δρουν ως αυξητικοί παράγοντες. Η συμπερίληψη μεταδιθειώδους νατρίου, πυροσταφυλικού νατρίου και αιμίνης εξουδετερώνει τις τοξικές ουσίες που μπορούν να σχηματιστούν στο μέσο καλλιέργειας υπό την επίδραση του οξυγόνου και σας επιτρέπει να κάνετε χωρίς μικροαερόβια ατμόσφαιρα. Το λυμένο αίμα είναι απαραίτητο για την εξουδετέρωση των ανταγωνιστών της τριμεθοπρίμης που υπάρχουν στο περιβάλλον.
Η επιλεκτικότητα του σταδίου εμπλουτισμού βελτιστοποιείται με ένα εκλεκτικό πρόσθετο (Άρθρο 06-131-LYO): η βανκομυκίνη είναι δραστική έναντι των θετικών κατά Gram μικροοργανισμών. Η κεφοπεραζόνη δρα κυρίως σε gram-αρνητικά βακτήρια. Η τριμεθοπρίμη είναι αποτελεσματική έναντι ενός ευρέος φάσματος gram-θετικών και αρνητικών κατά Gram κυττάρων και η κυκλοεξιμίδη ή η αμφοτερικίνη Β είναι αποτελεσματικά μυκητοκτόνα.
Παρασκευή
Διαλύστε 13,8 g σκόνης σε 500 ml απεσταγμένου νερού, θερμαίνετε εάν χρειάζεται. Αποστειρώστε σε αυτόκαυστο για 15 λεπτά στους 121ºC. Ψύξτε στους 47-50°C, προσθέστε άσηπτα 25 ml λυμένου αίματος αλόγου και 1 φιάλη εκλεκτικού συμπληρώματος Campylobacter Bolton (άρθρο 06-131-LYO). Ανακατέψτε καλά. Ρίξτε το παρασκευασμένο υλικό σε κατάλληλα δοχεία.
Σημείωση:Εάν ο ζωμός εμπλουτισμού προετοιμαστεί εκ των προτέρων, μπορεί να αποθηκευτεί στο θερμοκρασία δωματίουόχι περισσότερο από 4 ώρες ή στο σκοτάδι σε θερμοκρασία 3 ± 2°C όχι περισσότερο από 7 ημέρες.
Τεχνική σποράς
Το δείγμα προστίθεται στο μέσο σε ποσότητα (κατά βάρος ή όγκο) ίση με εννέα φορές τον όγκο του Bolton Selective Enrichment Broth για να ληφθεί αναλογία δείγματος δοκιμής/μέσου 1:10 (w/v ή v/v) και ομογενοποιείται .
Το Bolton Selective Enrichment Broth δεν απαιτεί μικροαερόβια επώαση, αλλά πρέπει να χρησιμοποιείται σε σφιχτά βιδωμένα δοχεία γεμάτα με λιγότερο από 20 mm χώρο κεφαλής στο επάνω μέρος.
Επωάστε το αρχικό εναιώρημα σε θερμοκρασία 37°C για 4-6 ώρες και στη συνέχεια στους 41,5°C για 44 ± 4 ώρες.
Για μεθόδους απομόνωσης και ταυτοποίησης, ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο ISO ή Βακτηριολογικής Ανάλυσης (BAM).
Αποθήκευση
Το μέσο προορίζεται μόνο για εργαστηριακή χρήση. Αποθηκεύστε το υλικό σε ένα βάζο με ερμητικά κλειστό καπάκι, σε σκοτεινό, ξηρό, δροσερό μέρος (θερμοκρασία μεταξύ +4°C και 30°C και υγρασία<60%)
Ελεγχος ποιότητας
Κάτοχοι του διπλώματος ευρεσιτεχνίας RU 2553224:
Η ομάδα των εφευρέσεων σχετίζεται με τη βιοτεχνολογία. Οι παραλλαγές του θρεπτικού μέσου για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων περιέχουν παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρου ή πεπτόνη κρέατος ή παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρου και πεπτόνη κρέατος (σε αναλογία 1:1), καθαρισμένη τροποποιημένη χολή (PBM), χλωριούχο νάτριο, γλυκόζη , μονουποκατεστημένο φωσφορικό κάλιο και λαμπερό πράσινο σε δεδομένη αναλογία. Οι εφευρέσεις καθιστούν δυνατή την αύξηση της αποτελεσματικότητας της συσσώρευσης εντεροβακτηρίων, τις εκλεκτικές ιδιότητες του μέσου και την απλοποίηση της μεθόδου λήψης ενός θρεπτικού μέσου. 3 n.p. αρχεία, 3 πίνακες, 9 πρ.
Η εφεύρεση σχετίζεται με την υγειονομική και κλινική μικροβιολογία και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων από νερό, προϊόντα διατροφής, κλινικό υλικό κ.λπ.
Κορυφαίες ξένες εταιρείες: Merck “Microbiology”, 2004-2005 σελ.202; Ιστορικό κρέας. Η περιεκτικότητα των συστατικών σε g/l παρουσιάζεται στον Πίνακα 1.
Για βακτηριολογικό έλεγχο σύμφωνα με την Κρατική Φαρμακοποιία της Ρωσικής Ομοσπονδίας, η XII έκδοση, η οποία ρυθμίζει τον κατάλογο των θρεπτικών μέσων για επιλεκτικό εμπλουτισμό εντεροβακτηρίων, παρέχεται ζωμός Mossel (Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel) OFS 42-0067-07.
Η επιλεκτική συσσώρευση όλων των τύπων εντεροβακτηρίων στον ζωμό Mossel οφείλεται στο γεγονός ότι μια υψηλή συγκέντρωση χολής βοδιού σε συνδυασμό με λαμπερό πράσινο καταστέλλει την ανάπτυξη της συνοδευτικής μικροχλωρίδας και η γλυκόζη προάγει την ανάπτυξη εντεροβακτηρίων. Τα φωσφορικά νάτριο-κάλιο παρέχουν μεγάλη ρυθμιστική ικανότητα στο μέσο, η οποία προστατεύει την καλλιέργεια από τις βλαβερές επιδράσεις του προκύπτοντος οξέος.
Μέχρι τώρα, στη Ρωσία, λόγω της έλλειψης ενός εγχώριου εμπορίου ξηρού θρεπτικού μέσου για τον επιλεκτικό εμπλουτισμό των εντεροβακτηρίων στην πρακτική της κλινικής και υγειονομικής μικροβιολογίας, χρησιμοποιείται εργαστηριακά παρασκευασμένος ζωμός Mossel και για τον έλεγχο της μικροβιολογικής καθαρότητας των φαρμακευτικών μέσων - μέσο Νο 3 (μέσο εμπλουτισμού για βακτήρια της οικογένειας Enterobacteriaceae).
Τα μειονεκτήματα του εργαστηριακού ζωμού Mossel σύμφωνα με τη συνταγή που παρουσιάζεται στο Global Fund, XII έκδοση, και το μέσο Νο. 3 είναι:
Δυσκολία προετοιμασίας;
Η χρήση μη καθαρισμένης χολής βοοειδών ως εκλεκτικός παράγοντας - μια ουσία χημικά αβέβαιης σύνθεσης που καθιστά δύσκολη την απόκτηση αντικειμενικών αποτελεσμάτων.
Έλλειψη οικιακών ξηρών παρασκευασμάτων - πεπτόνης και χολής, που έχουν υψηλό βαθμό διαφάνειας στα διαλύματα.
Η ανάγκη για διήθηση στην περίπτωση χρήσης των κύριων συστατικών του εγχώριου παραγόμενου μέσου, ως πρόσθετο βήμα στη διαδικασία παρασκευής.
Αδύναμη ανασταλτική ικανότητα έναντι των συνοδευτικών gram-θετικών μικροβιακών συνεργατών, ενώ παράλληλα διασφαλίζεται η ανάπτυξη εντεροβακτηρίων.
Αυξημένο κόστος του περιβάλλοντος εάν είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθούν εισαγόμενα φάρμακα.
Ο πιο κοντινός στον προτεινόμενο ζωμό Mossel είναι ο εμπορικός ζωμός Mossel (Merck), ο οποίος αποτελείται από τα ακόλουθα συστατικά, g/l:
Το μειονέκτημα ενός εμπορικού περιβάλλοντος (Merck) είναι:
Ανεπαρκής αποτελεσματικότητα στην ανάπτυξη και επιλεκτική συσσώρευση ενός αριθμού εντεροβακτηρίων.
Ανεπαρκώς εκφρασμένες ανασταλτικές ιδιότητες έναντι των σχετικών μικροβίων.
Περιορισμένη διαθεσιμότητα.
Ο στόχος της εφεύρεσης είναι να δημιουργήσει ένα οικιακό ξηρό θρεπτικό μέσο για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων, το οποίο είναι πιο αποτελεσματικό, με υψηλότερες εκλεκτικές ιδιότητες, εξασφαλίζοντας προσβασιμότητα και λήψη αντικειμενικών αποτελεσμάτων βακτηριολογικού ελέγχου.
Το πρόβλημα επιλύεται από το γεγονός ότι προτείνεται ένα ξηρό θρεπτικό μέσο για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων, που περιέχει πρωτεϊνική βάση, γλυκόζη, μονουποκατεστημένο φωσφορικό κάλιο και λαμπερό πράσινο, και ως πρωτεϊνική βάση περιέχει παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρων ή πεπτόνη κρέατος , ή παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρων και πεπτόνης κρέατος (σε αναλογία 1:1), καθαρισμένης τροποποιημένης χολής (PBM) και χλωριούχου νατρίου στην ακόλουθη ποσοτική αναλογία συστατικών, g/l:
Επιλογή πρώτη:
Επιλογή δύο:
Επιλογή τρίτη:
Το τεχνικό αποτέλεσμα επιτυγχάνεται μέσω της προκαταρκτικής παρασκευής ακατέργαστης χολής. Για το σκοπό αυτό, η γηγενής χολή βοοειδών βράζεται και φιλτράρεται μέσω υφασμάτων φίλτρου (ζώνης) σε ισοηλεκτρικά σημεία, σε κάθε τιμή pH, προκειμένου να καθιζάνει πρωτεΐνες και υψηλά μοριακά πεπτίδια. Το τελικό στάδιο της παρασκευής της χολής συνίσταται στην προσρόφηση των ακαθαρσιών από τον ενεργό άνθρακα, με την προσθήκη της υπολογιζόμενης ποσότητας διυποκατεστημένου φωσφορικού νατρίου ως προς την περιεκτικότητα σε ξηρά ουσία, το βρασμό και τη διήθηση. Αυτό εξαλείφει την πρόσθετη προσθήκη φωσφορικού νατρίου στο μέσο, εξασφαλίζοντας υψηλή ρυθμιστική ικανότητα του τελικού μέσου και τη διαφάνειά του. Η ισορροπία της σύνθεσης των συστατικών του μέσου, συμπεριλαμβανομένου του παγκρεατικού υδρολυμένου ιχθυάλευρου (PGHM), ως πρωτεϊνικής θρεπτικής βάσης, εξασφαλίζει καλή ανάπτυξη και εκλεκτικές ιδιότητες του ζωμού Mossel.
Η μέθοδος για την παραγωγή ζωμού Mossel περιλαμβάνει ανάμειξη ξηρών συστατικών, g/l:
Το παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρου ή πεπτόνης κρέατος παρέχει τις αναπτυξιακές ανάγκες των μικροοργανισμών για διατροφή με άζωτο. Η προκαταρκτική προετοιμασία της χολής βοοειδών καθιστά δυνατή τη λήψη καθαρισμένης τροποποιημένης ξηρής χολής (PBM), η οποία παρέχει υψηλή ρυθμιστική ικανότητα και διαφάνεια του τελικού θρεπτικού μέσου, ανασταλτικές ιδιότητες έναντι ανεπιθύμητης συνοδευτικής βακτηριακής χλωρίδας και επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων, η οποία δεν αναστέλλεται αποτέλεσμα του σχηματισμού όξινων αποβλήτων.
Η διαφορά μεταξύ του προτεινόμενου μέσου και του πρωτοτύπου είναι η δυνατότητα χρήσης, μαζί με την πεπτόνη κρέατος, του παγκρεατικού υδρόλυσης ιχθυάλευρου ως πρωτεϊνικής βάσης. Η τεχνολογία για την παρασκευή ακατέργαστης χολής χρησιμοποιώντας διυποκατεστημένο φωσφορικό νάτριο εξαλείφει την πρόσθετη προσθήκη της στο μέσο. Η ποσοτική αναλογία των συστατικών του θρεπτικού μέσου, το pH του, διασφαλίζει ότι το μέσο διατηρεί καλές ιδιότητες ανάπτυξης, την αποτελεσματικότητα της συσσώρευσης εντεροβακτηρίων και την ανασταλτική δράση στη μικροχλωρίδα που τη συνοδεύει. Το παρασκευασμένο μέσο παραμένει στείρο για τουλάχιστον 10 ημέρες
Για να επιτευχθεί ένα τεχνικό αποτέλεσμα στο στάδιο παραγωγής καθαρισμένης τροποποιημένης χολής (PBM), χολή μετά από καθίζηση πρωτεϊνών σε ισοηλεκτρικά σημεία, προσρόφηση ακαθαρσιών από ενεργό άνθρακα με προσθήκη διβασικού φωσφορικού νατρίου σε αναλογία 12,0 g για κάθε 20,0 g χολής, ως προς την ξηρή ύλη, που ξηραίνεται σε μονάδα ξήρανσης σε δονούμενη ρευστοποιημένη κλίνη A1-FMU.
Παράδειγμα 1. Για να προετοιμάσετε το μέσο σύμφωνα με την πρώτη επιλογή, πάρτε ζυγισμένες μερίδες από τα ακόλουθα συστατικά, g/l:
Το προτεινόμενο μέσο, διαφανές, πράσινο, εξασφαλίζει την ανάπτυξη και τη συσσώρευση των ακόλουθων δοκιμαστικών στελεχών της οικογένειας Enterobacteriaceae όταν εμβολιάζεται με 0,5 ml μικροβιακού εναιωρήματος από αραίωση 10-7:
E. coli O55:K59 3912/41
S. flexneri 1a 8516
S. typhimurium 79
Κ. πνευμονία 418
Κ. πνευμονία 3534/51
Το προτεινόμενο μέσο αναστέλλει σημαντικά την ανάπτυξη gram-θετικών μικροοργανισμών, ιδιαίτερα του S. aureus Wood-46, από αραίωση 10 -1.
Τα δοκιμαστικά στελέχη μικροοργανισμών που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο του περιβάλλοντος ελήφθησαν από το τμήμα συλλεκτικών καλλιεργειών του Ομοσπονδιακού Δημοσιονομικού Ιδρύματος Επιστήμης του Κρατικού Επιστημονικού Κέντρου Ιατρικής και Βιολογίας.
Παρασκευάστε ένα πρότυπο εναιώρημα καλλιέργειας για κάθε στέλεχος δοκιμής, που αντιστοιχεί σε 10 μονάδες του τυπικού δείγματος θολότητας OSO 42-28-85 P, χρησιμοποιώντας ένα στείρο διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9%. Τα προκύπτοντα εναιωρήματα καλλιέργειας αραιώνονται δεκαπλάσια (4,5 ml διαλύματος χλωριούχου νατρίου 0,9% με 0,5 ml μικροβιακού εναιωρήματος) αραιώνονται σε 10 -7 (για S. aureus Wood-46 - σε αραίωση 10 -1) και χρησιμοποιούνται για περιβάλλον ελέγχου.
Για τον προσδιορισμό των ιδιοτήτων ανάπτυξης, ο εμβολιασμός πραγματοποιείται με 0,5 ml ενός μικροβιακού εναιωρήματος κάθε στελέχους δοκιμής από μια αραίωση 10-7 σε 5,0 ml ζωμού Mossel, δηλ. 10 m.c./ml μέσου. Οι καλλιέργειες επωάστηκαν σε θερμοκρασία (37±1)°C για 20-24 ώρες.Τα αποτελέσματα βιολογικού ελέγχου εργαστηριακών δειγμάτων ζωμού Mossel σε ένα σύνολο δοκιμαστικών στελεχών παρουσιάζονται στον Πίνακα 2.
Παράδειγμα 2. Το μέσο παρασκευάζεται σύμφωνα με το παράδειγμα 1.
Παράδειγμα 3. Το μέσο παρασκευάζεται σύμφωνα με το παράδειγμα 1.
Τα αποτελέσματα του βιολογικού ελέγχου παρουσιάζονται στον Πίνακα 2 και είναι παρόμοια με τα αποτελέσματα της δοκιμής στο παράδειγμα 1.
Παράδειγμα 4. Για να παρασκευάσετε το ζωμό μύλων σύμφωνα με τη δεύτερη επιλογή, πάρτε ζυγισμένες μερίδες από τα ακόλουθα συστατικά, g/l:
Τα δείγματα αναδεύονται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού, χύνονται σε δοκιμαστικούς σωλήνες των 5 ml και αποστειρώνονται σε αυτόκαυστο στους 121°C για 5 λεπτά.
Παράδειγμα 5. Το μέσο παρασκευάζεται σύμφωνα με το παράδειγμα 4.
Τα αποτελέσματα του βιολογικού ελέγχου παρουσιάζονται στον Πίνακα 3 και είναι παρόμοια με τα αποτελέσματα των παραδειγμάτων δοκιμής 1, 2, 3 σύμφωνα με την επιλογή 1.
Παράδειγμα 6. Για να παρασκευάσετε το ζωμό μύλων σύμφωνα με την τρίτη επιλογή, πάρτε ζυγισμένες μερίδες από τα ακόλουθα συστατικά, g/l:
Τα δείγματα αναδεύονται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού, χύνονται σε δοκιμαστικούς σωλήνες των 5 ml και αποστειρώνονται σε αυτόκαυστο στους 121°C για 5 λεπτά.
Τα αποτελέσματα του βιολογικού ελέγχου του ζωμού Mossel σύμφωνα με την επιλογή 3 παρουσιάζονται στον πίνακα 3 και είναι παρόμοια με τα αποτελέσματα των δοκιμών στα παραδείγματα 1, 2, 3.
Παράδειγμα 7. Το μέσο παρασκευάζεται σύμφωνα με το παράδειγμα 6.
Τα αποτελέσματα του βιολογικού ελέγχου παρουσιάζονται στον Πίνακα 3 και είναι παρόμοια με τα αποτελέσματα των δοκιμών στα παραδείγματα 1, 2, 3.
Παράδειγμα 8. Το μέσο παρασκευάζεται σύμφωνα με το παράδειγμα 1.
Τα αποτελέσματα του βιολογικού ελέγχου παρουσιάζονται στον Πίνακα 2.
Αξιολόγηση της ποιότητας του προτεινόμενου μέσου για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων με παραβίαση της ποσοτικής αναλογίας των συστατικών:
Παράδειγμα 9. Το μέσο παρασκευάζεται σύμφωνα με το παράδειγμα 1.
Τα αποτελέσματα του βιολογικού ελέγχου παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Η παραβίαση της ποσοτικής αναλογίας των συστατικών του μέσου στα παραδείγματα 8, 9 οδηγεί σε επιδείνωση των ιδιοτήτων ανάπτυξης και αναστολής και, κατά συνέπεια, σε μείωση του συντελεστή απόδοσης του συσσώρευση εντεροβακτηρίων.
Από τους πίνακες συγκριτικών χαρακτηριστικών βιολογικού ελέγχου (Πίνακες 2, 3) είναι σαφές ότι το προτεινόμενο θρεπτικό μέσο σύμφωνα με τα παραδείγματα 1-7 έχει καλές ιδιότητες ανάπτυξης, είναι αποτελεσματικό στη συσσώρευση εντεροβακτηρίων και αναστέλλει την ανάπτυξη σταφυλόκοκκου.
Η οπτική καταγραφή των αποτελεσμάτων της συσσώρευσης εντεροβακτηρίων στο τέλος της περιόδου επώασης των καλλιεργειών έδειξε πανομοιότυπα αποτελέσματα στα μέσα δοκιμής και ελέγχου.
Μια αλλαγή στην ποσοτική αναλογία των συστατικών του περιβάλλοντος οδηγεί σε παραβίαση των βιολογικών δεικτών της ποιότητας του προτεινόμενου περιβάλλοντος.
Έτσι, στην περίπτωση παρασκευής του μέσου σύμφωνα με τα παραδείγματα 8, 9, παρατηρείται μείωση στην αποτελεσματικότητα της συσσώρευσης εντεροβακτηρίων και στην ανασταλτική δράση του μέσου έναντι του S. aureus Wood-46.
Για να ληφθούν δεδομένα σχετικά με την αποτελεσματικότητα του ζωμού Mossel, οι ενοφθαλμισμένοι σωλήνες κάθε δοκιμαστικού στελέχους που περιείχαν περίπου 10 mc/ml - (μηδενικός εμβολιασμός) επωάστηκαν σε θερμοκρασία (37±1)°C για 3 ώρες. Για τον προσδιορισμό της δόσης εμβολιασμού 0 1 ml μικροβιακού εναιωρήματος κάθε στελέχους δοκιμής από αραίωση 10-7 σπάρθηκε σε τρυβλία Petri με άγαρ GRM. Μετά την επώαση των καλλιεργειών στο μέσο συσσώρευσης, τα περιεχόμενα των σωλήνων αναμίχθηκαν και πραγματοποιήθηκε παρόμοια σπορά σε άγαρ GRM.
Μετά από 18-20 ώρες επώασης των καλλιεργειών σε άγαρ GRM σε θερμοκρασία (37±1)°C, μετρήθηκαν οι σχηματισθείσες αποικίες. Ο δείκτης αποτελεσματικότητας υπολογίστηκε από την αύξηση του αριθμού των αποικιών μετά την επώαση της καλλιέργειας σε ένα συσσωρευτικό μέσο στον αριθμό των αποικιών με μηδενικό ενοφθαλμισμό.
Τα συγκριτικά χαρακτηριστικά της αποτελεσματικότητας του ζωμού Mossel σύμφωνα με την επιλογή 1 παρουσιάζονται στον Πίνακα 3. Τα αποτελέσματα της αποτελεσματικότητας της συσσώρευσης εντεροβακτηρίων στον ζωμό Mossel που παρασκευάζεται σύμφωνα με τις επιλογές 2 είναι παρόμοια και συγκρίσιμα με τα αποτελέσματα που λαμβάνονται κατά τη δοκιμή του ζωμού Mossel, επιλογή 1.
Έτσι, έχει αναπτυχθεί ένα εγχώριο ανταγωνιστικό ξηρό θρεπτικό μέσο για τον επιλεκτικό εμπλουτισμό των εντεροβακτηρίων, το οποίο έχει μια σειρά από πλεονεκτήματα:
η αποτελεσματικότητα της συσσώρευσης εντεροβακτηρίων είναι 1,5-2,0 φορές υψηλότερη από ό, τι σε ένα εμπορικό περιβάλλον.
ο συντελεστής αναστολής έναντι του σταφυλόκοκκου είναι περισσότερο από 100 φορές υψηλότερος από εκείνον ενός ζωμού εμπλουτισμού του εμπορίου.
το θρεπτικό μέσο είναι εύκολο να παρασκευαστεί.
έχει αναπτυχθεί μια τεχνολογία για τη διαύγαση της χολής σε ισοηλεκτρικά σημεία με χρήση ενεργού άνθρακα και διυποκατεστημένο φωσφορικό νάτριο, η οποία εξαλείφει την περαιτέρω προσθήκη της στο θρεπτικό μέσο και διασφαλίζει τη διαφάνεια του τελικού προϊόντος.
εξαλείφεται η ανάγκη χρήσης ανύδρου φωσφορικού νατρίου διυποκατεστημένο στην παρασκευή ξηρού παρασκευάσματος.
τη δυνατότητα χρήσης παγκρεατικού υδρόλυσης ιχθυάλευρου μαζί με πεπτόνη κρέατος διατηρώντας παράλληλα την ανάπτυξη και τις εκλεκτικές ιδιότητες.
| Τραπέζι 1 | |||||
| Συσσωρευτικός ζωμός για εντεροβακτήρια σύμφωνα με το Mossel | |||||
| Οχι. | Όνομα εξαρτημάτων | Ζωμός EO Mossel EE Broth, Mossel HiMedia | Εντεροβακτηριακός ζωμός εμπλουτισμένος σύμφωνα με την Mossel LLC "GEM" | Ζωμός βρύου για εμπλουτισμό εντεροβακτηρίων (Enterobacteria Erichment Broth-Mossel OFS 42-0067-07) | |
| 1 | Παγκρεατική υδρολυμένη ζελατίνη | - | - | 10,0 | 10,0 |
| 2 | Πεπτόνη κρέατος | 10,0 | 10,0 | - | - |
| 3 | Μονοϋδρική γλυκόζη | 5,5 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
| 4 | χολή βοδιού | 20,0 | 20,0 | 20,0 | 20,0 |
| 5 | Δισυποκατεστημένο φωσφορικό νάτριο | 8,0 | 6,45 | 7,0 | 8,0 |
| 6 | Μονοϋποκατεστημένο φωσφορικό κάλιο | 2,0 | 2,0 | 3,0 | 2,0 |
| 7 | Πράσινο Διαμάντι | 0,015 | 0,0135 | 0,015 | 0,015 |
| pH του παρασκευασμένου μέσου | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 | 7,2±0,2 |
| πίνακας 2 | ||||||||
| Συγκριτικά χαρακτηριστικά βιολογικού ελέγχου ζωμού Mossel με βάση παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρων, g/l | ||||||||
| Οχι. | Όνομα του στελέχους δοκιμής | Αναπαραγωγή | Επιλογή 1 | Επιλογή 1 | Επιλογή 1 | Επιλογή 1 | Επιλογή 1 | Ζωμός εμπλουτισμού βρύων για εντεροβακτήρια (Mossel Broth) Merck |
| Παράδειγμα 1 | Παράδειγμα 2 | Παράδειγμα 3 | Παράδειγμα 8 | Παράδειγμα 9 | ||||
| 1 | E. coli 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 2 | Ε. coli 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ ίζημα |
| 3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| 3 | S. flexneri la 8516 | 10 -7 | ++ | ++ | ++ | + | + | ++ |
| 10 -6 | ++ | ++ | ++ | ++ | + | +++ | ||
| 4 | S. typhimurium 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ | ||
| 5 | Κ. πνευμονία | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | ++ | +++ |
| 418 | 10- 6 | +++ | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ αέριο | |
| 6 | S. aureus-Ξύλο-46 | 10 -1 | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | + ασθενής διάχυτη θολότητα του μέσου | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | |
| Πίνακας 3 | |||||||
| Συγκριτικά χαρακτηριστικά του βιολογικού ελέγχου ζωμού Mossel με βάση την πεπτόνη κρέατος και ένα μείγμα PGRM με πεπτόνη κρέατος σε αναλογία 1:1, g/l | |||||||
| Οχι. | Όνομα του στελέχους δοκιμής | Αναπαραγωγή | Επιλογή 2 | Επιλογή 2 | Επιλογή 3 | Επιλογή 3 | Ζωμός εμπλουτισμού βρύων για εντεροβακτήρια (Mossel Broth) Merck |
| Παράδειγμα 4 | Παράδειγμα 5 | Παράδειγμα 6 | Παράδειγμα 7 | ||||
| 1 | E. coli 25922 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 2 | Ε. coli 055:K59 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | ++ | +++ ίζημα |
| 3912/41 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| 3 | S. flexneri la 8516 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 4 | S. typhimurium 79 | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ | ||
| 5 | Κ. πνευμονία | 10 -7 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 418 | 10 -6 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++αέριο | |
| 6 | S. aureus-Ξύλο-46 | 10 -1 | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου | Χωρίς διάχυτη θολότητα του μέσου |
| *+++ - εξαιρετική ανάπτυξη με διάχυτη θολότητα του μέσου. ++ - καλή ανάπτυξη με διάχυτη θολότητα του μέσου. |
1. Θρεπτικό μέσο για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων, ξηρό (Ζωμός Mossel), που περιέχει πρωτεϊνική βάση, γλυκόζη, μονουποκατεστημένο φωσφορικό κάλιο και λαμπερό πράσινο, που χαρακτηρίζεται από το ότι περιέχει παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρου ως πρωτεϊνική βάση, που επιπλέον περιέχει καθαρισμένη τροποποιημένη χολή (PBM) και χλωριούχο νάτριο στην ακόλουθη ποσοτική αναλογία συστατικών, g/l:
2. Θρεπτικό μέσο για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων, ξηρό (ζωμός μύων), που περιέχει πεπτόνη κρέατος, γλυκόζη, φωσφορικό κάλιο μονουποκατεστημένο και λαμπερό πράσινο, που χαρακτηρίζεται από το ότι περιέχει καθαρισμένη τροποποιημένη χολή (PBM) και χλωριούχο νάτριο στην ακόλουθη ποσοτική ποσότητα συστατικά, g/l:
3. Θρεπτικό μέσο για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων, ξηρό (Ζωμός Mossel), που περιέχει πρωτεϊνική βάση, γλυκόζη, μονουποκατεστημένο φωσφορικό κάλιο και λαμπερό πράσινο, που χαρακτηρίζεται από το ότι η πρωτεϊνική βάση περιέχει παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρου και πεπτόνη κρέατος σε 1: 1 αναλογία, επιπλέον περιέχει καθαρισμένη τροποποιημένη χολή (PBM) και χλωριούχο νάτριο στην ακόλουθη ποσοτική αναλογία συστατικών, g/l:
Παρόμοια διπλώματα ευρεσιτεχνίας:
Η εφεύρεση αφορά ένα σύνολο ολιγονουκλεοτιδικών εκκινητών και ανιχνευτών για αναγνώριση και υποτυποποίηση του DNA του βακτηρίου Pasteurella multocida ορότυπων Α, Β, D, Ε, F με PCR πραγματικού χρόνου.
Η εφεύρεση αφορά ένα σύνολο σημασμένων με φθορισμό ολιγονουκλεοτιδικών ανιχνευτών για τον τύπο στελεχών Burkholderia mallei. Οι ανιχνευτές που περιλαμβάνονται στο κιτ έχουν δομή φουρκέτας με φθοροφόρο και σβηστήρα φθορισμού στα άκρα και είναι συμπληρωματικοί με τα προϊόντα της αντίδρασης ενίσχυσης με τους εκκινητές.
Η εφεύρεση σχετίζεται με τη μικροβιολογία τροφίμων, ειδικότερα με την παραγωγή ενός θρεπτικού μέσου για τον προσδιορισμό μικροοργανισμών που παράγουν λιπάσες σε προϊόντα ζαχαροπλαστικής.
Η εφεύρεση σχετίζεται με την ιατρική και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αναγνώριση μικροοργανισμών που παράγουν ουρεάση, ιδιαίτερα το Helicobacter pylori. Για να γίνει αυτό, πραγματοποιείται ταχεία ανάλυση σε διαγνωστικούς δίσκους για να προσδιοριστεί η δραστικότητα ουρεάσης των δειγμάτων.
Η ομάδα των εφευρέσεων σχετίζεται με τη βιοχημεία. Μια μέθοδος για τη λήψη ενός τυπικού δείγματος της θολότητας των βακτηριακών εναιωρημάτων, ενός τυπικού δείγματος της θολότητας των βακτηριακών εναιωρημάτων, της χρήσης ενός τυπικού δείγματος της θολότητας των βακτηριακών εναιωρημάτων, καθώς και ενός κιτ που περιέχει ένα πρότυπο δείγμα της θολότητας του προτείνονται βακτηριακά εναιωρήματα.
Παρουσιάζονται σετ ολιγονουκλεοτιδικών ανιχνευτών και εκκινητών, ένα βιολογικό μικροτσίπ και ένα δοκιμαστικό σύστημα για την ταυτοποίηση και τον τύπο των ιών της γρίπης Α και Β. Το χαρακτηρισμένο σύστημα δοκιμής περιέχει: ένα σύνολο αντιδραστηρίων για την απομόνωση RNA του ιού της γρίπης από ανθρώπινο βιολογικό υλικό. ένα σύνολο αντιδραστηρίων για τη διεξαγωγή ενίσχυσης PCR σε συνδυασμό με αντίστροφη μεταγραφή για να σχηματιστούν σημασμένα με φθορισμό θραύσματα του γονιδιώματος του ιού της γρίπης, που περιέχουν τους περιγραφόμενους ολιγονουκλεοτιδικούς εκκινητές. περιγράφεται ένα σύνολο αντιδραστηρίων για υβριδισμό θραυσμάτων DNA που λαμβάνονται μετά από ενίσχυση σε βιοτσίπ που περιέχει στοιχεία με ακινητοποιημένους ολιγονουκλεοτιδικούς ανιχνευτές. και, εάν χρειάζεται, αρνητικούς και θετικούς ελέγχους.
Η εφεύρεση αναφέρεται στη βιοτεχνολογία, ειδικότερα στον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε μικροοργανισμούς σε διάφορα αντικείμενα και περιβάλλοντα. Η μέθοδος περιλαμβάνει τη σύζευξη βακτηρίων με μια ηλεκτροχημική ετικέτα, η οποία είναι Fe0, MgFe2O4 ή Fe3O4, που πραγματοποιείται σε υδατικό περιβάλλον κάτω από καθορισμένες παραμέτρους.
Η εφεύρεση αναφέρεται στο πεδίο της ιατρικής μικροβιολογίας και βιοτεχνολογίας, ιδιαίτερα στη μικροβιολογική εργαστηριακή διάγνωση μολυσματικών ασθενειών. Το θρεπτικό μέσο περιέχει τρυπτόνη, εκχύλισμα ζύμης, γλυκόζη, χλωριούχο νάτριο, ανθρώπινα ερυθροκύτταρα 0(I) ομάδας Rh(+), θειικό σίδηρο(II), άγαρ Difco και απεσταγμένο νερό σε καθορισμένες αναλογίες συστατικών.
Η εφεύρεση σχετίζεται με τη βιοτεχνολογία και μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε βακτηριολογικές μελέτες για την απομόνωση και την ταυτοποίηση βακτηρίων του γένους Klebsiella και την παραγωγή θρεπτικών μέσων για αυτές τις μελέτες.
Έχει δηλωθεί μια ομάδα εφευρέσεων που σχετίζονται με τη βιομηχανία τροφίμων και ζύμωσης: καλλιέργειες τσαγιού από μύκητες kombucha, Medusomyces gisevii alfa και Medusomyces gisevii, καθώς και μια μέθοδος για την παραγωγή μιας βάσης που έχει υποστεί ζύμωση για την παραγωγή kvass, μια μέθοδος για την παραγωγή καλλιέργειας kombucha υγρό και μια μέθοδος για την παραγωγή ποτών από χυμό λαχανικών ή λαχανικά που έχουν υποστεί ζύμωση.
Η εφεύρεση σχετίζεται με τη βιοτεχνολογία, τη μικροβιολογία και τη γεωργία και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη λήψη ενός βακτηριακού παρασκευάσματος κατά φυτικών ασθενειών που προκαλούνται από φυτοπαθογόνους μύκητες του γένους Fusarium, Microdochium, Pyrenophora και Puccinia.Ανοσογόνος σύνθεση για τη θεραπεία ή πρόληψη του clostridium difficile, μέθοδος παρασκευής του και μέθοδος πρόκλησης ανοσοαπόκρισης στο c. difficile // 2550271
Προτείνεται μια ανοσογόνος σύνθεση για χρήση στη θεραπεία ή πρόληψη ασθενειών που σχετίζονται με το Clostridium difficile, μια μέθοδος για την παραγωγή μιας τέτοιας σύνθεσης με ανάμειξη των συστατικών της και μια μέθοδος για την πρόκληση ανοσοαπόκρισης στο C.
Η εφεύρεση αναφέρεται στον τομέα της βιοτεχνολογίας. Το στέλεχος Microbacterium species εναποτίθεται με αριθμό καταχώρισης BKM Ac-2615D, που χρησιμοποιείται για τον καθαρισμό υφάλμυρων και θαλάσσιων υδάτινων σωμάτων. Η εφεύρεση παρέχει ενισχυμένη καταστροφή ναφθενικών κλασμάτων, ετεροκυκλικών ενώσεων και ρητινών, καθώς και πολυαρωματικών ενώσεων, βενζο(α)πυρενίου και βενζο(α)ανθρακενίου σε λάδι. 1 άρρωστος, 2 τραπέζια, 1 π.χ.
Η ομάδα των εφευρέσεων σχετίζεται με τη βιοτεχνολογία. Οι επιλογές για το θρεπτικό μέσο για την επιλεκτική συσσώρευση εντεροβακτηρίων περιέχουν παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρου ή πεπτόνη κρέατος ή παγκρεατικό υδρόλυμα ιχθυάλευρου και πεπτόνη κρέατος, καθαρισμένη τροποποιημένη χολή, χλωριούχο νάτριο, γλυκόζη, μονουποκατεστημένο πράσινο κάλιο και χλωριούχο κάλιο δεδομένη αναλογία. Οι εφευρέσεις καθιστούν δυνατή την αύξηση της αποτελεσματικότητας της συσσώρευσης εντεροβακτηρίων, τις εκλεκτικές ιδιότητες του μέσου και την απλοποίηση της μεθόδου λήψης ενός θρεπτικού μέσου. 3 n.p. αρχεία, 3 πίνακες, 9 πρ.
