Верзијата со обратна фаза на HPLC (RP HPLC) има голем број на предности во однос на другите опции за течна хроматографија:

– ова е многу флексибилен метод, бидејќи со промена на составот на водено-органски мешавини што се користат како мобилна фаза, можно е да се обезбеди раздвојување на соединенија од различна природа на една колона;

– селективноста на овој метод е скоро секогаш значително повисока од другите опции за хроматографија за сите соединенија освен високополарните

– кога се користат хидрофобизирани силика гелови, брзо се воспоставува рамнотежа помеѓу мобилната и стационарната фаза; овие сорбенти се карактеризираат со висока ефикасност на сепарација;

– можно е да се издвојат соединенијата кои се растворливи и во вода и во органски растворувачи;

– можноста за користење на пуферски раствори во мобилната фаза може да ја подобри селективноста и ефикасноста на сепарацијата на јонските соединенија.

Во хроматографијата со обратна фаза, стационарната фаза се хидрофобизирани силика гелови, кои се добиваат со третирање на силика гел со хлоро- и алкоксисилан. Во аналитичката практика широко се користат хидрофобизирани силика гелови со пресадени октадецилни групи (C18).Густината на калемењето е 1,1-2,3 nm-2.

ВО Во зависност од методот на обработка, својствата на хидрофобизираните силика гелови може да се променат, така што својствата на комерцијалните столбови од различни компании се разликуваат малку. Содржината на јаглерод е 5-20%. Степенот на покриеност на површината на силика гелот со органски модификатор е 10-60%, во најдобри случаи достигнува 90%. Присуството на резидуални силинолни групи води до фактот дека

механизмите за задржување на адсорпција и јонска размена секогаш ја придружуваат обратната фаза. За да се намали бројот на силинолни групи, сорбентите дополнително се обработуваат со триметилхлоросилан (ова се нарекува ендкапинг). Во табелата Слика 12 покажува типични сорбенти во обратна фаза. Најпопуларните силика гелови се следните марки: бондопак, лихросорб, порасил, сепарон, сферисорб, нуклеосил, кромасил. Недостатоците на сорбентите со обратна фаза базирани на силика гел се ограничениот дозволен опсег на pH и активноста на сорпција на силинолните групи. Колоните од новата генерација од Phenominex во голема мера се ослободени од овој недостаток; нејзината колона Luna C18 е стабилна во опсегот на pH од 1,5-10.

Механизам за одвојувањеИдентитетот на соединенијата во оваа верзија на хроматографија сè уште не е целосно јасен. Најуспешни и најраспространети се теоријата која користи идеи за параметрите на растворливост на Хилдебрант и солвофобната теорија на Хорват-Меландер. Според теоријата заснована на параметрите на растворливост на Хилдебрант, задржувањето се одредува со молекуларните интеракции на одвоените супстанции со мобилната и стационарната фаза. Зависноста на факторот на капацитет на супстанцијата од составот на мобилната фаза е опишана со равенката

lnk = Aφ2 + Bφ + C (12),

каде φ е волуменската фракција на органската компонента (модификатор) во мобилната фаза, A, B и C се константи.

Сепак, однесувањето на соединенијата со сложена структура со неколку функционални групи често не може да се опише со оваа зависност. Моделите на задржување на сорбат во RP HPLC се поадекватно опишани со солвофобната теорија. Хорварт и Мајландер беа првите кои покажаа дека водените елуенти кои не содржат

Табела 12. Сорбенти за HPLC во обратна фаза

Sp, m2/g

Форма на честички

честички, микрони

Адсорбсил S8

Неправилни

Адсорбсил S18

Неправилни

Адсорбсфера C8

Сферични

Адсорбсфера C18

Сферични

Алтима C8

Сферични

Алтима S18

Сферични

AlphaBond S8

Неправилни

AlphaBond S18

Неправилни

М-Бондопак С18

Неправилни

М-Бондопак фенил

Неправилни

Хиперсил С8

Сферични

Hypersil UDS

Сферични

Зорбакс С8

Сферични

Зорбакс ОДС

Сферични

Diasorb-130-S1

Неправилни

Diasphere 130-S8

Сферични

Diasfer-130-S18T

Сферични

Лихросорб РП-2

Неправилни

Лихросорб РП 18

Сферични

Сферични

Сферични

Нуклеосил C18

Сферични

Партисил ОДС-3

Неправилни

Сепарон S18

Сферични

Силасорб C2

Неправилни

Силасорб C8

Неправилни

Силасорб C18

Неправилни

Сферични

Сферисорб S18

органски растворувачи може да се користат за одвојување на поларните биолошки молекули на октадецил силика гел. Дури и во отсуство на органска компонента во елуентот, интеракцијата помеѓу растворената супстанција и пресадените јаглеводородни радикали

стационарна фаза, беше причина за задржување на растворената супстанција. Ова доведе до заклучок дека задржувањето во варијантата со обратна фаза главно се одредува со хидрофобни интеракции.

Најважната улога во разбирањето на механизмот на задржување на хроматографијата со обратна фаза ја одигра работата на Хорват и неговото училиште. Суштината на теоријата на Хорват е како што следува. Постои фундаментална разлика помеѓу процесите на сорпција на поларни површини од релативно неполарни растворувачи („режим на нормална фаза“) и сорпција од вода или високополарни растворувачи на неполарни површини („режим со обратна фаза“). Во првиот случај, соработниците се формираат помеѓу молекулите на сорбати и стационарни фази поради Кулонови интеракции или водородни врски. Во вториот случај, причината за асоцијацијата на површината се таканаречените солвофобни интеракции во мобилната фаза. Поларните мобилни фази, особено оние што содржат вода, се карактеризираат со силна Кулонова интеракција и формирање на водородни врски помеѓу молекулите на растворувачите. Сите молекули во таквите растворувачи се прилично цврсто врзани со интермолекуларни сили. За да се постави молекула на сорбат во оваа средина, неопходно е да се формира „шуплина“ помеѓу молекулите на растворувачот. Енергетските трошоци за формирање на таква „шуплина“ се само делумно покриени со интеракцијата на поларните групи во молекулата на сорбат со молекулите на поларните растворувачи. Неполарните молекули од стационарната фаза се исто така во слична положба во однос на растворувачот. Од енергетска гледна точка, поповолна позиција е кога интерфејсот помеѓу поларната средина (растворувач) и неполарните фрагменти од стационарната фаза и молекулите на сорбат е минимална. Намалувањето на оваа површина се постигнува при сорпција (сл. 15).

Ориз. 15. За механизмот на хроматографија со обратна фаза: а - сорбат во раствор; б - сорбат на површината на стационарната фаза. Молекулите на вода и органски растворувач се означени со светли и темни кругови, соодветно.

Хроматографијата со обратна фаза е широко користена не само за одвојување на неутрални соединенија, туку и за јонски супстанции. Во принцип, за такви соединенија процесот на сорпција е опишан со солвофобната теорија. Меѓутоа, сорбатите од овој вид постојат во раствор и во адсорбирана состојба, и во форма на неутрални молекули и во форма на јони. Секоја од овие форми одговара на сопствената вредност на факторот на задржување. Во зависност од рН на медиумот, се менува односот на различни форми во растворот и факторите на задржување.

Како подвижна фаза обично се користат мешавини на растворувачи, бидејќи ова овозможува да се подобри селективноста и ефикасноста на одвојувањето и да се намали времето потребно за негово спроведување.

Со промена на составот на мобилната фаза во RPLC, можно е да се промени задржувањето во многу широки граници. За речиси сите анализирани соединенија задржувањето во некои чисти растворувачи (метанол, тетрахидрофуран) е занемарливо, а во чиста вода е исклучително високо. Затоа, за да се постигне прифатливо време на задржување,

Обично е неопходно да се користат мешавини на вода со органски растворувач - таканаречен модификатор. Зависноста на факторот на задржување на супстанцијата од составот на мобилната фаза е опишана со равенката

каде што C е концентрацијата на органски

компонента (модификатор) во

мобилната фаза, b и p се константи.

Под постојани хроматографски услови, задржувањето на различни сорбати се одредува од следниве фактори:

– хидрофобност на сорбати;

– диполен момент;

– волуменот на нивните молекули;

– поларизација;

– намалување на неполарната површина за време на сорпцијата.

Кога се опишува врската помеѓу задржувањето и својствата на сорбатите, најпопуларните равенки се оние кои ги поврзуваат факторите на задржување измерени во хроматографски систем со коефициентите на дистрибуција (најчесто во системот октанол-вода). За соединенија со слична структура, се забележува линеарна врска помеѓу логаритмите на коефициентите

каде Pi,j е коефициент на дистрибуција на супстанцијата помеѓу водната и органската фаза.

Во многу случаи, логаритмот на факторот на задржување е линеарно поврзан со

Најчестиот дескриптор е бројот на јаглеродни атоми. Овие соодноси се корисни и при изборот на составот на мобилната фаза

и за одвојување и за идентификација на компонентите на смесата.

За да се реши секој специфичен проблем, составот и на мобилната и на стационарната фаза мора внимателно да се избере од гледна точка и на физичките и на хемиските својства на неговите компоненти. Општата шема за избор на опција за HPLC во зависност од природата на супстанциите што треба да се одвојат е прикажана на сл. 16.

HPLC систем за сепарација се состои од неколку блокови: пумпа, диспензер, колона, детектор и уред за снимање.

Да ги погледнеме главните типови на пумпи што се користат во HPLC.

Пумпи за шприц.Вртењето на прецизен синхрон мотор се претвора во движење на клипот во цилиндар. Кога клипот се движи, мобилната фаза или влегува во цилиндерот или се истиснува од него. Предноста на овој тип на пумпа е речиси целосно отсуство на пулсирања во протокот на мобилната фаза; недостаток е неможноста да се создаде градиент со помош на една пумпа.

Пневматски засилувачки пумпи. Обезбедете постојан притисок на влезот во столбот. Предности – отсуство на пулсирања на протокот, висока доверливост; недостаток е малата репродуктивност на волуметриското снабдување на мобилната фаза.

Клипни пумпи со клип. Со помош на електромеханички уред се вози вовозвратендвижење на клипот што се движи во работната глава, како резултат на што пумпата или ја собира мобилната фаза или ја испорачува со дадена брзина. Предноста е постојаното волуметриско снабдување на мобилната фаза; недостаток се прилично големите пулсирања на протокот, кои се главната причина за зголемен шум и намалена чувствителност на детекторот.

Ориз. 16. Избор на услови за HPLC земајќи ја предвид хидрофобноста на супстанциите што се одвојуваат

За да се воведе примерок во течна хроматографија, се користат следниве типови диспензери:

– јамка за дозирање

– диспензери со мембрана (без запирање на протокот и со запирање

Главни типови на детекториа нивните карактеристики се дадени во табела. 13. Најчестиот детектор во адсорпционата HPLC е спектрофотометриски. За време на елуирањето на супстанциите, оптичката густина на елуатот се мери во специјално дизајнирана микрокувета на претходно избрана бранова должина што одговара на максималната апсорпција на супстанциите што се одредуваат. Таквите детектори ја мерат апсорпцијата на светлината во ултравиолетовиот или видливиот регион на спектарот, при што најчесто се користи првиот. Ова се должи на фактот дека повеќето хемиски соединенија имаат прилично интензивни апсорпциони ленти во опсегот на бранова должина од 200-360 nm. Фотометриските детектори имаат прилично висока чувствителност. Чувствителноста на УВ детекторот може да достигне 0,001 единица. оптичка густина по скала при 1% шум. Со таква висока чувствителност, може да се детектираат до неколку ng супстанци кои дури и слабо апсорбираат УВ. Широкиот опсег на линеарност на детекторот овозможува анализа и на нечистотиите и на главните компоненти на смесата во еден хроматограм. Способностите на спектрофотометрискиот детектор значително се проширија по доаѓањето на неговиот модерен аналог, детекторот со диодна низа (DMA), кој работи и во УВ и во видливите региони. Во таков детектор, „матрицата“ на фотодиоди (има повеќе од 200 од нив) постојано ја снима апсорпцијата на електромагнетното зрачење во режимот на скенирање. Ова ви овозможува да снимате, при висока чувствителност, неискривени спектри на брзо минување низ нив

ќелија за детектор на компоненти. Во споредба со детекцијата на една бранова должина, споредбата на спектрите добиени за време на врвното елуирање овозможува идентификација на одвоени компоненти со многу повисок степен на доверба.

Принцип на работафлуориметриски детектор се заснова на мерење на флуоресцентната емисија на апсорбираната светлина. Апсорпцијата обично се врши воУВ област спектар, брановите должини на флуоресцентното зрачење ги надминуваат брановите должини на апсорбираната светлина. Флуориметриските детектори имаат многу висока чувствителност и селективност. Нивната најважна област на примена е откривање на ароматични полициклични јаглеводороди.

Амперометриски детектор се користи за одредување на органски соединенија кои можат да се оксидираат на површината на цврста електрода. Аналитичкиот сигнал е големината на струјата на оксидација. Детекторот има најмалку две електроди - работна електрода и референтна електрода (сребро хлорид или челик); понекогаш е инсталирана помошна електрода, која е неопходна за да се потисне влијанието на омскиот пад на напон во раствори со мала спроводливост. Успешноста на определувањето се одредува со изборот на материјалот и потенцијалот на работната електрода. Амперометрискиот детектор користи електроди направени од јаглеродни материјали, најчесто стаклен јаглерод и метални електроди: платина, злато, бакар, никел. Потенцијалот на работната електрода е поставен во опсег од 0 - +1,3 V. Мерењата може да се извршат или со постојан потенцијал или во пулсен режим, кога е поставено тристепено чистење на потенцијалот, кое обезбедува во различни фази - оксидација на супстанција, чистење на електродата и нејзина регенерација. Користејќи го ова

детекторот е особено важен за определување на феноли, фенолни соединенија, хидразини, биогени амини и некои амино киселини.

Кондуктометриски детектор се користи за определување на неоргански анјони и катјони во јонска хроматографија. Принципот на неговото функционирање се заснова на мерење на електричната спроводливост на мобилната фаза за време на елуирањето на супстанцијата.

Табела 13. Детектори за течна хроматографија со високи перформанси кои се користат во анализа на животната средина

Тип на детектор

Мерливи

Минимум

Селективност

параметар

одлучен

количина, г

Спектрофото

Оптички

10 -10

метрички

густина

Флуориметрија -

Интензитет

10 -11

флуоресценција

Диригент -

Електрична жица -

10-9

рик

Амперометриски

Моментална вредност

10-11 - 10-9

Масен спектро-

Големина

10 -12 – 10 -10

метрички

јонска струја

Масовните медиуми се исклучително информативни.

спектрометриски детектор , кој има висока чувствителност и селективност. Главниот проблем што ја отежнува употребата на овој детектор е проблемот со воведувањето на протокот на елуентот во масениот спектрометар. Развојот на микроколумна хроматографија овозможува

развиваат системи за директно вбризгување на протокот на елуентот во јонскиот извор на масениот спектрометар. Користете масени спектрометри со висока резолуција

И доволна брзина со хемиска јонизација при

атмосферски притисок или јонизација со електропрскање. Најновите модели на масени спектрометри за течна хроматографија работат во масениот опсег m/z од 20 до

4000 аму Масовниот спектрометриски детектор има строги барања за чистотата на растворувачите, скап е и сложен

во оптек.

3.1.2. Користење на течна хроматографија со високи перформанси во обратна фаза за решавање на проблемите со животната средина

Определување на загадувањето на водата и почвата. Течна хроматографија со високи перформанси активно се користи за одредување на различни екотоксиканти во водите и почвите. Најзначајните проблеми што ги решава HPLC при анализата на водата и почвата се определувањето на фенолни соединенија, PAH и пестициди. Бидејќи максимално дозволените концентрации на овие екотоксанти во водите и почвите се многу ниски, нивното определување обично се врши по прелиминарна концентрација или изолација. За ова може да се користи течно-течна екстракција, но попогоден и ефективен метод е сорпција или екстракција во цврста фаза.

Одредување на феноли во отпадните и природните води. Многу вообичаени екотоксикаси се фенолот и неговите деривати на хлор и нитро, гвајаколот и крезолите. Овие соединенија се формираат за време на човечки производствени активности, особено вопулпа и хартијапроизводство. Потребно е да се определат во различни видови води: природни,

водоснабдување, индустриски и отпадни води. Составот на водата е многу сложен и може да вклучува голем број на фенолни соединенија, кои се формираат и во фазата на загадување и при прочистување на водата. Најверојатните компоненти на отпадната вода се фенол, гвајакол, о-, м- и р-крезоли, моно-, ди-, три- и пентахлорофеноли, моно- и динитрофеноли. За одвојување и истовремено одредување на испарливи и ниско испарливи феноли, употребата на течна хроматографија со високи перформанси на хидрофобизиран силика гел е многу успешна. Ефикасноста и селективноста на одвојувањето на фенолот се одредува според составот на мобилната фаза. Најчесто, мешавините на ацетонитрил или метанол со пуферски раствори (ацетат или фосфат) се користат за одвојување на фенолите во HPLC; успешно раздвојување на фенолите од различни состави може да се постигне ако како водена компонента се користи вода закиселена со оцетна, хлорооцетна или фосфорна киселина. на мобилната фаза. Времето на задржување на фенолите се одредува според нивната хидрофобност и се зголемува со неговото зголемување. За најзначајните феноли, загадувачи на животната средина, задржувањето се зголемува во серијата: катехол< фенол < 4-нитрофенол < гваякол < п-крезол < 2,4-нитрофенол < 2-нитрофенол < 2-хлорфенол < 4- хлорфенол < 3-хлорфенол < 2,4-диметилфенол < 4-хлор-3-метилфенол < 2,4-дихлорфенол < 2,4,6- трихлорфенол < пентахлорфенол и зависит от состава подвижной фазы. Чем больше в ней содержание ацетонитрила или метанола, тем меньше удерживание. Для разделения столь сложной смеси фенольных соединений не удается подобрать подвижной фазы определенного состава. Необходимо либо использование градиентного элюирования, либо разные фенолы делят с использованием различных подвижных фаз.

Ниските максимално дозволени концентрации на фенолни соединенија во водите бараат чувствителни методи за откривање или прелиминарни

концентрација. Откривањето на фенолите со користење на DDM е доста успешно, границата за откривање на фенол на бранова должина од 260 nm во овој случај достигнува 1 mg/l. Амперометрискиот детектор има уште поголема чувствителност и селективност на фенол и неговите деривати. Неговата употреба овозможува да се одредат фенолите на ниво на MPC дури и во природните води. Во природните води, максималната дозволена концентрација на фенол е 0,001 mg/l, p-хлорофенол - 0,002 mg/l, 2,4-дихлорофенол - 0,004 mg/ml, 2,4,6 - трихлорофенол - 0,006 mg/l и пентахлоропен - 0,01 mg/l. Амперометриското детекција се заснова на оксидација на фенолите на површината на цврста електрода, која обично е стаклена јаглеродна електрода. Утврдено е дека максималниот сигнал е снимен на потенцијалот на стаклената јаглеродна електрода - +1300 mV во однос на челичната електрода или +1100 mV во однос на референтната електрода сребро-сребрен хлорид. Важно е да се користи фосфорна киселина како компонента на мобилната фаза; во овој случај, флуктуациите во основниот сигнал на амперометрискиот детектор се минимални, што овозможува да се намали вредноста на минималната забележлива концентрација, што одговара на сигналот еднаква на двојно поголема „широчина“ од основната линија. Во табелата 14. Примери за определување на фенол во водите под различни услови се дадени на сл. 17 е прикажан хроматограм на смесата, а Сл. 18 – 20 определување на феноли во вода од чешма и отпадна вода.

Дефиниција на пестициди. Во современото земјоделство, хемиските соединенија се широко користени за борба против штетници, габи и плевел, таканаречени пестициди. Заедно со несомнените придобивки, големото производство и неконтролираната употреба на пестициди доведе до значително влошување на еколошката состојба.

Табела. 14. Примери за определување на фенолни соединенија во водите со HPLC

Одредени феноли

Стационарна фаза

Мобилна фаза

Детектор

смин, mg/l

Катехол, фенол, 4-нитрофенол, 2-

Сферисорб C18,

метанол (MeOH) - 1%

0,03 ─0,1 (директно

нитрофенол, р-крезол, 2,4-динитрофенол,

раствор од оцет

2,4-диметилфенол, 2-хлорофенол, 4-

киселински градиент

(0,65 ─ 1,0) 102

хлорофенол, 2,4-дихлорофенол, 2,4,6-

(прелиминарно

трихлорофенол, пентахлорофенол

25 ─ 100% MeOH

концентрација

Hypersil Green C18

ацетонитрил (АН) - 1%

(0,3 – 8,0) 102

раствор од оцет

(прелиминарно

киселини; градиент

концентрација

Кромасил Ц18, 5

30 ─ 100% АН

(2,5 – 27) 103

MeOH – H2O;

(0,04 – 0,3) 103

градиент режим:

фенол, 2-хлорофенол, 2,4-дихлорофенол, 2,4,6-

25 ─ 100% MeOH

трихлорофенол, пентахлорофенол

AN ─ 0,1% раствор на H3 PO4

Фенол, гвајакол, п-крезол, о-крезол,

AN ─ 0,1% раствор на H3 PO4

Пирагалол, 4-хидроксианилин, бензкатехол,

2-хидроксианилин, фенол, крезоли, моно-,

Силика гел C18,

MeOH ─ 0,1 М раствор

8 10-5 – 4 10-4

ди-, трихлорофеноли, моно-, динитрофеноли,

Na2 HPO4 ─ 50 nM

клетки

пентахлорофенол

нитрилен триоцетик

киселина ─ 0,03 М раствор

натриум додекал сулфат;

градиент режим

Ориз. 17. Хроматограм на смесата: 2 – фенол; 3 – гвајакол; 4 – p-крезол; 5 – о-крезол; 6 – хлорокрезол; 7 – p-хлорофенол; 1 – системски врв Колона: (150x4,6) mm, Mightysil RP-18; Мобилна фаза:

ацетонитрил:вода:фосфорна киселина (20.0:79.9:0.1)% вол.

Ориз. 18. Хроматограм на примерок од отпадна вода од фабрика за пулпа и хартија: 1 – системски врв; 2 – 2,4,6-трихлорофенол; 5 – пентахлорофенол; 3,4,6 – неидентификувани врвови.

Колона (150x4,6) mm Mightysil RP-18; Мобилна фаза:

ацетонитрил:вода:фосфорна киселина (70,0:29,9:0,1)% вол. Стапката на напојување на мобилната фаза е 0,7 ml/min. Детекторот е амперометриски. Потенцијал на работна електрода 1300 mV

Ориз. 19. Хроматограм на вода од чешма со додавање на феноли (1 μg/l) со прелиминарна екстракција на јонски пар: 1 – фенол; 2 – 4-нитрофенол; 3 – 2,4-динитрофенол; 4 – 2-хлорофенол; 5 – 2-нитрофенол; 6

– 2,6-диметилфенол; 7 - 2,4-диметилфенол; 8 - 2-метил-4,6-динитрофенол; 9 - 4-хлоро-3-метилфенол; 10 - 2,4-дихлорофенол; 11-2,4,6-триметилфенол; 12 - 2,4,6-трихлорофенол; 13 – пентахлорофенол. Колона: челик (250x4,6 mm), Spherisorb ODS-2, 5 µm; Мобилна фаза: метанол – 1% оцетна киселина, градиент режим (метанол 25-100%); спектрофотометриски детектор, 280 nm (пентахлорофенол 302 nm)

Ориз. 20. Хроматограм на примерок од вода од чешма со додадени феноли: 1 – фенол (0,1 µg/l); 2 – 2-хлорофенол (0,1 μg/l); 3 – 2,6-дихлорофенол (0,2 μg/l); 4 – 2,4-дихлорофенол (0,2 μg/l).

Фенолите беа концентрирани од 30 ml.

Колона (150x4,6) mm Mightysil RP-18. Мобилна фаза:

ацетонитрил:вода:фосфорна киселина (70,0:29,9:0,1)% вол. Стапката на напојување на мобилната фаза е 0,7 ml/min. Детекторот е амперометриски; Потенцијал на работна електрода – 1300 mV

Бидејќи пестицидите влегуваат во телото на луѓето кои немаат професионален контакт со пестициди, главно преку храна и вода, неопходен е постојан систем за анализа на квалитетот на земјоделските производи, храната и водата. Во овој случај, најголем интерес има за методите на анализа кои би можеле да се користат не само во научното истражување, туку и во сериската аналитичка контрола од големи размери. Со оглед на високата токсичност на пестицидите, следењето бара специфични и многу чувствителни аналитички методи кои овозможуваат определување на остатоци од пестициди и нивните метаболити на нивоа во трагови.

Хроматографските аналитички методи имаат поголема чувствителност и можат да разликуваат поврзани соединенија и нивните метаболити или производи за хидролиза. Во последно време, HPLC се повеќе се користи за одредување и сепарација на пестициди. Методот е најзгодно за анализа на ниско испарливи или термички нестабилни пестициди кои не можат да се анализираат со помош на гасна хроматографија.

HPLC најуспешно се користи за одредување на карбамати, уреа, хербициди врз основа на феноксиоцетни киселини, триазини и нивни метаболити, бензимидозоли и некои други соединенија.

Еден од најпопуларните хербициди се триазините, од кои повеќето се деривати на с-триазин, шестчлен хетероцикл со симетрично распоредени азотни атоми. Супституентите се наоѓаат на позициите 2,4 и 6. Најпознати се три триазини: пропазин, атразин и симазин, последните два се вклучени во листата на приоритетни загадувачи за земјите од ЕУ. Максималната дозволена концентрација на триазини во водата за пиење е поставена на 100 ng/l. Кога се анализираат водите, триазините обично се претходно концентрирани и потоа се одвојуваат со RP HPLC. Стационарната фаза се хидрофобизирани силика гелови, мобилната фаза е мешавина од ацетонитрил со вода или пуфер раствори.Триазините се детектираат со помош на детектор на диодна низа, УВ, амперометриски и масени спектрометриски детектори. Примери за HPLC определување на триазини во водите и почвата се дадени во Табела. 15.

Табела 15. Примери за определување на пестициди во водите и почвата со HPLC

Пестициди што може да се детектираат

Стационарна фаза

Мобилна фаза

Детектор

Cmin, mg/l

Триазини: атразин, симазин, пропазин,

Ultracarb C18,

Ацетонитрил (AN) - 1 mM

прелиминарните

прометин, тетбутилазин, деетиларазин,

фосфат пуфер

концентрација

деизопропилатразин, хидроксиатразин

раствор, pH 7

(0,8-3,0) 10-3 mg/kg

градиент режим

15 – 70% АХ

Триазини: хидроксиатразин,

Хиперсил Ц18

Ацетонитрил (АН) - 1 mM

амперомет

2,10-5 М

хидроксизимазин, хидроксидеетилатразин

фосфат пуфер

рик

раствор, pH 6,5

градиент режим

30-100% АХ

Деривати на фенилуреа:

Супелкосил Ц18,

AN-H2 O

прелиминарните

Монурон, флуметирон, Диурон, сидурон,

градиент режим

концентрација

линурон, небурон

40 – 90% АХ

(2-4)10-3

(0,4-3)10-4

Сулфонилуреа

Хлорсулфурон, метилсулфурон,

Ултрасфера C18,

MeOH–H2O (pH 2,5),

прелиминарните

хлоримурон, тифенсулфурон

градиент режим

концентрација

Виосфер C6, 5 µm

40-70% MeOH

Циносулфурон, тифенсулфурон, метил-

LiСhrospher C18,

MeOH – 0,1% H3 PO4

0,01-0,05 mg/kg

сулфурон, сулфометурон, хлорсулфурон

Карбамати: карбарил, профарм, метиокарб,

Супелкосил Ц18,

AN–H2 O (55:45)

прелиминарните

промекарб, хлорпрофам, барбан

концентрација

(0,3-8)10-3

7. Соли на кватернерни амониумски бази: паракват, дикат, дифензокват, хлормекват хлорид, мепикват

8. Кисели хербициди: дикамба, бентазон, беназолин, 2,4 Д, MCPA(2-метил-4-хлорофеноксиоцетна киселина)

9. Фосфонски и аминокиселински деривати: глифосат, глуфозинат, биалофос

10. Мешавини на пестициди од различни класи Симазин, фенсулфотион, изопрокарб, фенобукарб, хлоротилонил, етридиазол, мепронил, пронамид, мекрпром, бенсулид, изофенофос, тербутол

11. Симазин, дихлорвос, тирам, 1,3-дихлоропропен, фенобукарб, пропизамин, ипрофенфос, изопротиолан, хлоротилонил, фенитротион, диазитион, изохатион, тиобенкарб, хлорнитрофен, азулан, ипродион, бенсулин

12. Беномил, 2,4-Д, дикамба, римсулфурон, хлорсулфурон, линурон, хлорсулфоксим, пропиконазол, дифеноконазол

(0,1–10)10-4

Силика гел C18,

AN со адитиви на NaCl,

4.4.10-4 mg/kg

MeOH - раствор

хидроксид

тетраметиламониум

LiChrosorb C18

MeOH – 0,01 М триетил

прелиминарните

амин, pH 6,9

концентрација

градиент режим

(0,2–1,0)10-4

MeOH – 0,05 M NaH2PO4,

Флуоресцентни

0,2.10-4

Нова-Пак Ц18

AH - 0,05 M NaH2 PO4,

(0,3–1.0)10-4

LiChrosorb NH2

0,02 М ТМА бромид

Капиларна

AN -H2 O

прелиминарните

LC колона

градиент режим

концентрација

Паркинг C18,

(0,15–0,8)10-3

AN - 1 mM фосфат

прелиминарните

пуфер раствор, pH 6,

концентрација

градиент режим

(0,04–0,5)10-3

Дијасфера C16, 5 µm

АН – 0,01 М фосфат

пуфер раствор, pH 4,2

Друга група на пестициди за кои употребата на HPLC е повеќе ветувачка од капиларна гасна хроматографија се дериватите на фенилуреа. Најпознати од нив се линурон, монолинурон, пиразон и сулфонилуреа (хлорсулфурон, тифенсулфурон, римсулфурон, метилсулфурон итн.).

HPLC е исто така широко користен за одвојување и одредување на карбамати. Особено внимание се посветува на дефиницијата за карбарил, профарма, метиокарб. Условите за раздвојување на фенилуреите, сулфонилуреите и карбаматите се блиски до условите за раздвојување на триазините.

Опсегот на детектори што се користат вклучува: детектор со диодна низа, УВ, флуориметриски и масени спектрометриски детектори. Амперометрискиот детектор е широко користен. Овој детектор обезбедува зголемување на чувствителноста во споредба со УВ при определување на карбамат и деривати на уреа (алдикарб, карбарил, хлорпрофарм, диметоат, метиокарб) за приближно 10 пати. Некои примери за раздвојување на сулфонилуреа, фенилуреа и карбамати се прикажани во Табела. 15 и на сл. 21.

Селективни хербициди - деривати на феноксиоцетна киселина (2,4-D, дикамба, бентазон, трихлорпир, итн.), исто така се претпочитаат да се одредуваат со HPLC. Стационарната фаза е хидрофобни силика гелови, мобилната фаза е мешавина од ацетонитрил или метанол со пуфер раствори или вода со додадени киселини. Изборот на pH на мобилната фаза е особено важен кога се анализираат киселинските соединенија, неговата вредност е избрана пониска од pKa на соединенијата што се одвојуваат. За да се зголеми селективноста на одвојувањето, може да се користи и верзија на јонски пар на HPLC со обратна фаза.

Ориз. 21. Хроматограм на екстракт од почва со додавање (10 µg/g) хербициди, деривати на фенилуреа: 1 – циносулфурон; 2 – тиофенсулфурон метил; 3 – метилсулфурон метил; 4 – сулфометурон метил; 5 - хлорсулфурон.

Челична колона (100x4,6 mm), силика гел C18, 3 микрони. Мобилна фаза метанол – 0,1% раствор на фосфорна киселина (45:55). Спектрофотометриски детектор, 226 nm

Триетиламинот се користи како реагенс на јонски пар за да се зголеми задржувањето на дикамба, бентазон, беназолин, 2,4-D и MCPA (2-метил-4-хлорофеноксиоцетна киселина) на октадецилика гел при неутрална pH вредност. На овој начин се одредуваат киселинските хербициди во водата за пиење и подземните води (Табела 15). Откривањето се врши со помош на УВ детектор; најниските граници на детекција се добиваат за УВ детектор со диодна низа.

Важна задача е и одвојувањето на мешавините што содржат пестициди од различни класи, бидејќи во објектите на животната средина тие

хидрофобизирани силика гелови: поларните соединенија се елуираат веќе при ниска содржина на ацетонитрил (20-30)% во мобилната фаза, повеќе хидрофобни при поголема содржина (до 70%), затоа, се користи режим на елуција на градиент за одвојување на мешавините. Примери за сепарација на мешавини на пестициди се прикажани на сл. 22, 23.

Ориз. 22. Хроматограм на вода со додадени пестициди (0,2 mg/l) по прелиминарна концентрација на сорпција: 1 – дизизопропилатразин; 2 – метамитрон; 3 – хлордиазон; 4 – диетиларазин; 5 – кримидин; 6 – карбетамид; 7 – бромацил; 8 – симазин; 9 – цијаназин; 10 – диетилтербутилазин; 11 - карбутилат; 12 – метабензтиазурон; 13 – хлортолурон; 14 - атразин; 15 – монолинурон; 16 – изопротурон; 17 – метазахлор; 18 – метапротрин; 19 – димефурон; 20 – себутилазин; 21 – пропазин; 22 – тетбутилазин; 23 – линурон; 24 – хлорчурон; 25 – прометрин; 26 – хлорпрофарм; 27 – тербутрин; 28 – метолахлор; 29 – пентисурон; 30 – бифенокс; 31 – пердиметалин.

Колона: LiChroCART (250x4 mm), Superspher 100 RP-18, 5 µm; мобилна фаза ацетонитрил - 1 mM амониум ацетат (градиент режим - ацетонитрил 25–90%). Спектрофотометриски детектор, 220 nm

Ориз. 23. Хроматограм на сепарација на мешавина од пестициди: 1-беномил метаболит (2 μg/ml); 2 – ацетамиприд (4 μg/ml); 3 – ленацил (10 μg/ml); 4

– дикамба (4 μg/ml); 5 - хлорсулфурон (5 µg/ml); 6 - тирам (5 μg/ml); 7 - хлорсулфоксим (8 μg/ml); 8 – пенконазол (5 μg/ml); 9 - линурон (5 μg/ml); 10 – флудиоксонил (5 μg/ml); 11-пропиконазол (5 μg/ml); 12 - дифеноконазол (5 µg/ml).

Услови за хроматографско определување: Diaspher C16 колона (150x4,6) mm со просечна големина на честички од 5 µm; мобилна фаза acetonitrium-0,01 M фосфат пуфер раствор (pH 4,2) (40:60). Брзината на мобилната фаза е 1 ml/min. Спектрофотометриски детектор (230 nm)

Одвојувањето на органохлорните пестициди со помош на HPLC сè уште се проучува. Се чини дека ова делумно се должи на недостатокот на јавно достапни селективни методи за откривање по одвојувањето со хроматографија со обратна фаза. Границата за откривање на органохлорните пестициди (како што е ДДТ) и естрите на феноксикарбоксилна киселина со апсорпција на 254 nm е 1-15 и 15 μg, соодветно.

Како метод за анализа на остатоци од органофосфорни пестициди, HPLC не е широко користен. Овие соединенија се детектираат со апсорпција на 254 nm, инхибиција на холинестераза и

поларографски. Применливоста на детекторите осетливи на фосфор во HPLC за селективно откривање на органофосфорни соединенија е докажана.

Едно од важните прашања што ја одредува чувствителноста на определувањето на пестицидите е методот на детекција. Повеќето студии се карактеризираат со употреба на спектрофотометриски метод, но неговата употреба е ограничена од голем број фактори: не сите соединенија апсорбираат добро, различните соединенија имаат различни спектри на апсорпција. Затоа, многу е тешко да се избере соодветна бранова должина. Во еколошките објекти може да има и други соединенија, во чие присуство ќе биде тешко определувањето на пестицидите.

Неодамна, можностите за електрохемиска детекција (ECD) во течната хроматографија се широко истражени. Во обид да се подобри чувствителноста на HPLC определувањето на органохлорните пестициди, Долан и Сибер дизајнираа подобрена верзија на Coulson Electrolytic Conductivity Detector (ECDC). Овој детектор се карактеризира со висока селективност за определување на органохлорните соединенија, неговиот линеарен опсег одговара на промена на концентрацијата во рамките на пет реда на големина, а долната граница на детекција на линдан е 5-50 ng. Применливоста на ECDC во аналитички систем беше докажана со анализа на сурови екстракти од лисја од зелена салата и речна вода што содржи алдрин и дилдрин во концентрации помали од 10-4%. Користењето на УВ детектор со бранова должина од 254 или 220 nm во овој случај не дозволува определување на алдрин и дилдрин.

Ограничувањата за откривање постигнати со помош на волтаметриски детектори, релативната едноставност на уредот и разумната цена го прават овој метод доста погоден за анализа на траги од органски супстанции. Кога користите ECD што работи во

режим на обновување, еден од значајните проблеми е обновувањето на кислород растворен во елуентот, чиј врв може да се меша со определувањето на аналитот. Постојат различни начини да се отстрани растворениот кислород, но при толку ниски забележливи концентрации на пестициди не е секогаш можно да се ослободат од количините во трагови. Во таа насока, доколку е можно, определувањето на пестицидите се врши во регионот на анодниот потенцијал.

Во комбинација со методот HPLC, најчесто користен метод е амперометриската детекција, во која потенцијалот на работната електрода се одржува константен, а струјата што произлегува од оксидацијата или редукцијата на електроактивните молекули се мери во функција на времето. Амперометрискиот детектор ви овозможува да одредите со висока чувствителност широк спектар на пестициди: тирам, триазини (симазин, атразин, цијаназин, пропазин и анилазин), карбамат пестициди (барбан, бајгон, беномил, хлорпрофам, ландрин, месурол, профам, севин, аминокарб, карбендазим, десмедифам), пестициди на фенилуреа (метобромурон и линурон). Овие соединенија се одредуваат во водите со помош на амперометриски детектор, во повеќето случаи границите за откривање се пониски отколку со спектрофотометриски детектор. На пример, границата за откривање на аминокарб и карбендазим е помала од 1 μg/L, десмедифам и дихлоран се помали од 5 μg/L, метамитрон 10 ng/L, хлортолурон и изопротурон 20 ng/L.

Определување на полициклични ароматични јаглеводороди

(PAH). Течната хроматографија често се користи за одредување на PAH во водите и почвите. Кога е неопходно истовремено да се одредат средно и ниско испарливи ароматични јаглеводороди, обично се избира обратна фаза течна хроматографија со високи перформанси.

Поради уникатните својства и широката достапност на обратните фази на октадецил силика (ODS), повеќето студии за PAH се направени на овие фази. Како што се намалува должината на ланецот на пресадениот јаглеводороден радикал, вредностите на коефициентот на капацитет брзо се намалуваат, што значително ја отежнува анализата на повеќекомпонентните мешавини на PAH. Така, под идентични услови (состав на мобилна фаза, брзина на проток на елуент, температура, димензии на колоната), времето на задржување на PAH на колона со Nucleosil C18 е приближно двојно подолго од Nucleosil C8. Се верува дека молекулите на PAH се држат на неполарната површина на алкисилилика гел поради ван дер Валс сили, а јачината на врската се зголемува со зголемување на должината на страничниот синџир.

За раздвојување на PAH се користат и сорбенти со пресадени поларни групи. Радикалите на алкил(арил)алканите кои се користат за модификација на површината на сорбентите содржат една или повеќе поларни групи (-NH2, -NO2, -OH, -CN, итн.). Механизмот на задржување на PAH на сорбенти со пресадени поларни групи е доста сложен.

Се зема предвид интеракцијата помеѓу π – електронскиот систем на компонентите на примерокот и различните структури на поларната површина. Несупституираните PAH се елуираат по редослед на зголемување на молекуларната тежина. Во поларната фаза која содржи амино групи, задржувањето на PAH се зголемува со бројот на ароматични јадра во молекулата. За разлика од колоните со хидрофобни силика гелови, во поларните фази присуството на алкилни групи во молекулите на PAH има мало влијание врз редоследот на задржување, што овозможува овие фази да се користат за пред-фракционирање кога се анализираат сложени мешавини на PAH.

Во пракса, раздвојувањето на PAHs почесто се врши на хидрофобни силика гелови, бидејќи селективноста на раздвојувањето е поголема, репродуктивноста на резултатите е подобра и работниот век на хроматографските колони е подолг.

Во хроматографијата во обратна фаза, за раздвојување на PAH, најчесто како елуенти се користат смесите на вода-алкохол (вода-метанол) и мешавини вода-ацетонитрил. Релативното време на задржување за поединечни PAH се разликуваат во голема мера, така што почесто се користи режим на елуција на градиент.

Постојат многу опции за откривање на PAH: амперометриски, флуоресцентни, ултравиолетови. Најчесто користен метод е флуоресцентна детекција на PAHs. HPLC во комбинација со флуоресцентен детектор е селективен и чувствителен метод за одредување на PAH во природни примероци. Детекторот со спектрофотометриска низа на диоди UV-Vis е корисен за квантитативна и квалитативна анализа на PAH во примероци од почва во опсегот на нанограми, додека детекторот за флуоресценција се препорачува за анализа на PAH во примероците на вода во опсегот на пикограми.

Највисоката чувствителност на детекторот за флуоресценција може да се добие само при оптимални бранови должини на возбудување и флуоресценција на поединечни PAH. Ова е можно само со програмирање на овие бранови должини со текот на времето. По оптимизацијата на сите поединечни параметри, минималната граница за откривање за поединечни PAH во водата за пиење достигнува ниво од 0,5 пикограми.

Широко прифатените упатства на EPA препорачуваат определување на нафталин, аценафтилен, аценафтен и флуорен со помош на ултравиолетовиот детектор и користење детектор за флуоресценција за сите други PAH. На сл. Слика 24 го прикажува раздвојувањето на мешавина од 16 приоритетни PAH.

Ориз. 24. Хроматограм на стандардна мешавина од EPA полициклични ароматични јаглеводороди: 1 – нафталин; 2 – аценафтен; 3 – флуорен; 4 – фенантрен; 5 - антрацен; 6 – флуорантен; 7 – пирен; 8 – 3,4-дибензантрацен; 9 – хризен; 10 - 3,4-бензофлуорантен; 11 - 11,12-бензофлуорантет; 12 – 3,4-бензопирен; 13 – 1,2,5,6-дибензантраце и 1,12-бензперилен; 14 – 2,3-о-фениленпирен.

Колона (150x4,6mm) Mightysil RP-18; мобилна фаза: (75:25)

ацетонитрил-вода: детектор ─ флуоресцентен, режим на програмирање според бранови должини на флуоресценција

Одредување на PAH во објекти на животната средина, особено во водите

И почвите е важен проблем во практичната аналитичка хемија.

ВО Во литературата има многу трудови посветени на определување на PAH со HPLC во водите и почвите. Податоците од овие работи се сумирани во Табела 1, соодветно. 16 и 17.

Тешкотиите во одредувањето на PAH со помош на HPLC се поврзани со потребата за прелиминарно прочистување на екстрактите и основните тешкотии при идентификување на сродните соединенија.

хемиски

структура

изомерни

врски.

Табела 16. Определување на PAH со HPLC во водите

Утврдени PAHs

Стационарна фаза

Мобилна фаза

Детектор

Cmin, ng/l

Пиење

Fl, B(b)F, B(k)F, B(a)P,

Ацетонитрил: вода

B(g,h,i)P, Ind(1,2,3-cd)P

(250x4,6) mm, 5µm

Градиент режим

Загадени

Ацетонитрил: вода

(100x8) mm, 5 микрони

Градиент режим

Лихросфер РАС С-18

Ацетонитрил: вода

(125×2) mm, 4 µm

Градиент режим

Површни

Метанол:вода (85:15)с

(250x4,6) mm, 5µm

Spherisorb S5 RAS

Ацетонитрил: вода (80:20)

(150× 4,6) mm, 5 µm

изократски режим

Fl, B(b)F, B(k)F, B(a)P,

Метанол: вода (85:15)

B(g,h,i)P, Ind(1,2,3-cd)P

(165×4,6) mm, 5 µm

изократски режим

Површни

Ацетонитрил: вода

(250x4,6) mm, 5µm

Градиент режим

Fl, P, B(a)P

Ацетонитрил: вода

(150×4) mm, 5 µm)

Градиент режим

Природно

Лихросфер 100 RP-18

Ацетонитрил: вода (80:20)

0,5 ng/l (B(a)P)

(125×4) mm, 5 µm

изократски режим

Fl, B(b)F, B(k)F, B(a)P,

SpherisorbODS - 2

Ацетонитрил: вода (80:20)

~ 8 стр (B(a)P)

B(g,h,i)P, Ind(1,2,3-cd)P

(300×4) mm, 5 µm

изократски режим

Урбана

Hypersil Green PAH

Ацетонитрил: вода

(100× 4,6) mm, 5 µm)

Градиент режим

Забелешки:Fl – флуоресцентен детектор; Засилувач – амперометриски детектор;

TCAA - трихлороцетна киселина; i-PrOH – изопропанол; 16 PAHs – 16 PAHs од стандардната мешавина на EPA

Fl – флуорантен; P – пирен; B(b)F – бенз(б)флуорантен; B(k)F – бенз(k)флуорантен; B(g,h,i) – бенз(g,h,i)перилен;

Ind(1,2,3-cd)P – идено(1,2,3-cd)пирен;

Софтвер – ограничување за откривање

Табела 17. Определување на PAHs со HPLC во почвите

Тип на почва

Може да се дефинира

неподвижен

Подвижен

со мин,

Седиментни

C18 ((250× 4,6)

Ацетонитрил:

седименти

Градиент

Почва

C18 ((250× 4,6)

Ацетонитрил:

B(k)F, B(a)P,

Градиент

Силноза-

Ацетонитрил:

валкани

вода (80:20)

ODS ((243×4)

Исократски

режим на знак

C18 ((250× 4,6)

Ацетонитрил:

валкани

Градиент

Седиментни

C18 ((250× 4,6)

Ацетонитрил:

седименти

Градиент

Кога се анализираат примероците од речна вода, бидејќи тие може да содржат нечистотии од флуоресцентни соединенија, при релативно време на задржување на PAH, се предлага да се користи прелиминарно раздвојување на фракциите на PAH со тенкослојна хроматографија (TLC) и последователна анализа на одделни PAH фракции со обратна фаза HPLC со детектор за флуоресценција.

Во почвите и сложените природни мешавини на PAH, може да биде неопходно да се користи методот HPLC во нормална фаза за да се одредат специфичните изомери на PAH. Овој метод обезбедува одвојување и концентрација на изомери кои тешко се определуваат вкупно

Фракциите на PAH поради ниските концентрации или поради релативно ниската чувствителност и селективност на детекцијата на флуоресценција. Опишан е метод за одвојување на природен екстракт од морски седименти на аминопропил силика гел. Овој прелиминарен чекор обезбедува фракции кои содржат само изомерни PAH и изомери супституирани со алкил. Фракциите на изомерни PAH се анализираат со HPLC во обратна фаза со детектор на флуоресценција.

Така, HPLC користејќи флуоресцентни и ултравиолетови детектори овозможува да се одредат PAH во различни објекти. Успешноста на анализата се определува и од условите на одвојување и откривање, и со соодветна подготовка на примерокот за анализа.

Утврдување на загаденоста на воздухот. За одредување на загадувачите во водата, HPLC се користи поретко отколку во водата и почвата. Овој метод е неопходен за одредување на токсични високомолекуларни и високо вриени органски соединенија во воздухот: тие вклучуваат диоксини, пестициди, полихлоробифенили, PAHs, феноли, ароматични амини и имини, асарени (хетероциклични метил јаглеводороди што содржат азот) и нивните деривати на јаглеводороди. Во сите случаи, компонентите што претходно контаминираат се собираат од воздухот во специјални концентрациони цевки, а по екстракцијата од адсорбентната фаза, добиениот раствор се анализира со HPLC.

Најважно е определувањето на PAH во воздухот (максимално дозволената концентрација за атмосферскиот воздух е 10-6 mg/m3, воздухот на работната површина е 1,5-10-4 mg/m3), анализата на концентратот се врши во на ист начин како што е опишано за водата и почвата. Големо внимание се посветува и на определувањето на фенолите и крезолите. Оваа задача е важна за станбени простории, бидејќи градежните материјали, облогите и мебелот можат да испуштаат феноли. Тие се заробени со пумпање воздух низ алкални раствори или на специјални

Вовед

Поглавје 1. Постојни методи за определување на содржината на пестицидите во анализираните објекти (приказ на литература)

1.1. Подготовка на примерокот со помош на екстракција на цврста фаза 6

1.2. Методи за квалитативна карактеризација на пестицидите 16

1.3. Квантитативна анализа на пестициди 20

Поглавје 2. Техника и експериментални услови

2.1. Определување коефициенти на дистрибуција на пестициди во системот хексан/ацетонитрил со употреба на гасно-течна и обратна фаза течна хроматографија со високи перформанси 24

2.2. Определување на степенот на екстракција на пестициди од моделски водени раствори со користење на екстракција во цврста фаза 30

2.3. Определување на линеарно-логаритамски индекси на задржување и релативна оптичка густина на пестициди во обратна фаза течна хроматографија со високи перформанси 32

2.4. Квантитативна проценка на содржината на пестициди во растителни објекти со помош на надворешни стандардни и стандардни адитивни методи 34

2.5. Определување содржина на пестициди во реални растителни објекти.39

Поглавје 3. Проценка на степенот на екстракција на пестициди од моделски водени раствори во услови на екстракција во цврста фаза врз основа на нивните коефициенти на дистрибуција во системот хексан/ацетонитрил и параметрите на хидрофобност

3.1. Карактеристики на употребата на течна хроматографија со високи перформанси со обратна фаза при определување на коефициентите на дистрибуција на пестициди во системот хексан/ацетонитрил 42

3.2. Проценка на параметрите на хидрофобност на потенцијалните органофосфорни пестициди врз основа на нивните индекси на задржување во обратна фаза на течна хроматографија со високи перформанси 48

3.3. Проценка на врската помеѓу степенот на екстракција на пестициди од водени раствори при екстракција во цврста фаза и нивните коефициенти во октанол/вода и хексан/ацетонитрилни системи 59

Поглавје 4. Толкување на резултатите од идентификација и квантификација на пестициди во растителни објекти

4.1. Избор на оптимални аналитички параметри за хроматографска карактеризација на пестицидите 63

4.2. Споредба на надворешни стандардни и стандардни адитивни методи за проценка на содржината на пестициди во растителни објекти 71

Користена литература 92

Апликации 105

Вовед во работата

Широката употреба на хемиски производи за заштита на растенијата ја става анализата на пестицидите во земјоделските производи и еколошките објекти меѓу приоритетните задачи на еколошката аналитичка контрола. Во овој поглед, како и со новите барања наметнати од Rostekhregulirovanie за методите на контрола, постои потреба да се подобрат старите и да се развијат нови методи за одредување микроколичини на пестициди [со употреба на гасно-течна хроматографија (GLC) и течна хроматографија со високи перформанси ( HPLC), кој би ја комбинирал едноставноста на постапката за одредување со максимална веродостојност на добиените резултати. Новите пристапи за одредување на количеството во трагови на екотоксиканти може да помогнат успешно да се реши овој проблем.

Најважните фази на анализа на пестициди се: подготовка на примерок и финална интерпретација на податоците, вклучувајќи и квалитативна и квантитативна карактеризација на анализираните соединенија. Подготовката на примерокот за анализа обично се состои од екстракција, реекстракција и прочистување на колоната. Екстракција на цврста фаза (SPE) е алтернативен пристап за нејзино спроведување. Комбинира голем број од горенаведените процедури во една, што заштедува време и реагенси. Меѓутоа, за да се оптимизира процесот на SPE, потребни се некои информации за целните супстанции, особено за нивните коефициенти на дистрибуција во хетерофазните системи на растворувачи 1-октанол/вода (log P) и хексан/ацетонитрил (K p). Во референтната литература за пестициди, заедно со другите физичко-хемиски карактеристики, се дадени log P вредностите на пестицидите. Сепак, проблемот со нивното дефинирање сè уште останува релевантен поради постојните потешкотии кои се јавуваат во процесот на дефинирање. Главната е

формирање на бавно одвојувачки емулзии на двата растворувачи еден во друг. Ова се рефлектира во ниската интерлабораториска репродуктивност на вредностите на лог P на пестицидите. Затоа, се чини дека е важно систематски да се карактеризираат пестицидите од различни хемиски групи, првенствено нивните коефициенти на дистрибуција во системите октанол/вода и хексан/ацетонитрил, како и индексите на задржување во реверзна фаза на течна хроматографија со високи перформанси [RP (HPLC)]. Последново може да се користи не само за да се идентификуваат анализираните соединенија, туку и да се проценат нивните параметри на хидрофобност. Проширувањето на таквата база на податоци за физичко-хемиските карактеристики на пестицидите и опсегот на карактеристични соединенија ќе помогне, од една страна, целосно да се спроведе подготовката на примерокот, а од друга, да се идентификува. Сепак, за недвосмислена и сигурна квалитативна карактеристика, еден од достапните параметри не е доволен. Неопходно е да се оцени информациската содржина на различни комбинации на аналитички параметри на пестициди, што ќе овозможи со максимална сигурност да се реши проблемот со нивната идентификација.

Последната фаза на анализа по подготовката на примерокот и квалитативната карактеризација на анализираните соединенија е квантитативната проценка на нивната содржина во испитуваните примероци. Постојните методи за квантитативна хроматографска анализа на пестициди (апсолутна калибрација, метод на интерен стандард) не можат да се наречат оптимални. Апсолутниот метод на калибрација во присуство на систематски грешки при подготовката на примерокот (по правило, поради загуби на бараните супстанции во различни фази) без воведување фактори за корекција доведува до потценети резултати, а употребата на методот на внатрешен стандард е ограничена за пребарување на потребното стандардно соединение и прелиминарна дополнителна, трудоинтензивна процедура за специјална подготовка на примерокот за извршување на определувањето.

6 Така, целта на оваа работа беше да се подобрат постоечките и да се развијат нови методи за одредување на пестициди во растителни објекти. За да се реши овој проблем, неопходно е да се оптимизира секоја од главните фази на анализа на пестициди. Предложената оптимизација вклучува: употреба на SPE во фазата на подготовка на примерокот, а при финалната интерпретација на податоците - избор на најоптимална комбинација на аналитички параметри за хроматографска идентификација на пестициди, како и избор и употреба на метод за нивна квантитативна проценка, што овозможува минимизирање на систематските грешки во определувањето.

Методи за квалитативна карактеризација на пестицидите

Идентификацијата на пестицидите (како и сите други органски супстанции) за време на хроматографската анализа (GLC и HPLC) често се врши со параметри на задржување [апсолутно и релативно време на задржување, индекси на задржување (линеарни, логаритамски, линеарно-логаритамски)] во фази од различни поларитети (GLC) или во различни начини на елуција (HPLC). Спроведувањето на квалитативна анализа на пестицидите во апсолутни времиња се врши под строго одредени услови, на ист инструмент со користење на потребните стандардни (референтни) соединенија. Помалку зависни од специфичните аналитички услови се релативното време на задржување (времето на задржување во однос на некоја стандардна супстанција). Тие се значително повеќе репродуктивни во услови на изотермална сепарација (GLC) и услови на изократско елуирање (HPLC). Тие можат да се користат за споредување на податоците добиени во различни стационарни услови, на различни инструменти, во различни лаборатории. Сепак, природата на стационарните фази (GLC), типот на колоните и составот на елуентот (HPLC) мора да останат фиксни. Како стандардна врска, се препорачува да изберете врска од иста класа како онаа што се дефинира. Ако параметрите на задржување (индекси на задржување (RI)) се одредат во однос на два стандарда, од кои едниот има пократко, а другиот подолго време на задржување од посакуваното соединение, тогаш тие ќе се карактеризираат со уште поголема интерлабораториска репродуктивност од релативното време на задржување. Индексите на задржување можат да се претстават во линеарна, логаритамска и линеарно-логаритамска форма. Индексите на задржување во логаритамска форма се користат во изотермичен режим (GLC) или режим на изократско елуирање (HPLC). Во случај на анализа на сложени мешавини во услови на програмирана промена на температурата на колоната (GLC), се користат линеарни индекси на задржување. Меѓутоа, како што е прикажано во најдобрата форма на претставување на параметрите на задржување под овие услови се линеарно-логаритамските индекси на задржување. Нивната предност лежи во високата репродуктивност и во режимот на линеарно програмирање на температурата и во изотермалниот режим (GLC), како и во различните режими на елуција (изократски, градиент) на мобилната фаза во HPLC. Индексите на задржување нашле примена не само во анализата на пестицидите, туку и на другите органски загадувачи. Сепак, употребата на параметрите за задржување на хроматографската материја е поврзана со нејаснотија во евалуацијата. Ова се должи на реалната можност за нивно совпаѓање со параметрите за задржување на коекстрактивните супстанции обично присутни во примерокот (коекстрактивите се соединенија извлечени од матрицата заедно со аналитот).

Друг метод за идентификација на супстанции се заснова на употреба на селективни детектори. Гасна хроматографска анализа на пестицидите се врши со помош на три селективни детектори - термионски и пламено фотометриски детектори се користат при анализа на соединенија што содржат азот, фосфор и сулфур, а детекторот за заробување електрони се користи за анализа на халогени супстанции. Употребата на алтернативни детектори е ограничена со фактот дека иако некои се регистрирани со потребната чувствителност. Анализата на пестицидите во услови на HPLC со обратна фаза се врши со речиси еден селективен ултравиолетови (УВ) детектор, чија селективност се контролира со избор на фиксни бранови должини. Употребата на диодни низи овозможува снимање на апсорпција на неколку бранови должини, со што се обезбедува поголема веројатност за квалитативна карактеризација на пестицидите.

Еден од најсигурните начини за идентификација на екотоксикантите се хибридните методи засновани на хроматографско одвојување на анализираните супстанции и последователна идентификација со помош на спектрални (маси, инфрацрвени, атомски емисии) детектори. Во овој случај, покрај хроматограмите со утврдени параметри на задржување, се евидентираат и соодветните (масени, инфрацрвени, атомски емисии) спектри на соединенијата. Сепак, како што е забележано во , „ниту еден познат аналитички метод не може да гарантира сигурна идентификација на какви било соединенија“. Треба да се додаде дека употребата на хибридни методи е ограничена со скапа опрема.Предностите и ограничувањата на секој од методите што се користат за квалитативна карактеризација на пестицидите се илустрирани во Табела 1.2.

Определување на линеарно-логаритамски индекси на задржување и релативна оптичка густина на пестициди во обратна фаза течна хроматографија со високи перформанси

Во работата се користени пестициди, чиј список е претставен во Табела 2.1., како и соединенија (1-23) со општата структурна формула RRP(=X)SR (Табела 2.2.), синтетизирани во Институтот за органоелементни соединенија ( Москва), физичко-хемиски својства кои се карактеризираат во. Одвојувањето на соединенијата со обратна фаза HPLC беше извршено на течен хроматограф Waters со Nova-Pac Qg колона (3,9 x 150 mm) и UV детекција на бранови должини од 220 и 254 nm. Мешавина од ацетонитрил и вода се користеше како мобилна фаза; брзината на проток на елуентот беше 1 ml/min. Анализата беше спроведена во режим на градиентно елуирање со почетна концентрација на CH3CN од 10% и стапка на промена од 1,5% во минута. Мртвото време на системот беше одредено со дозирање на раствор на калиум бромид (220 nm). Времето на задржување беше снимено со помош на софтверот Millennium. За да се одредат вредностите на RI, во примероците беше внесена мешавина од референтни n-алкилфенил кетони PhCOCnH2n+i (n = 1-3,5). Индексите за задржување на линеарни дневници [RI(HPLC)] беа пресметани со помош на програмата (QBasic) дадена во прирачникот. За да се пресметаат RI вредностите (HPLC) на соединенијата кои имаат време на задржување пократко од оние на првата референтна компонента (ацетофенон), алгоритмот за екстраполација на времето на задржување опишан во. За да се одредат релативните оптички густини Aotn = A(254)/A(220), хроматограмите беа снимени паралелно на две означени бранови должини, проследено со пресметување на односот на површината на врвовите Aotn = S(254)/S(220). Пресметка на параметрите на линеарна регресивна равенка од формата: log P = al +b, каде што / се индексите на задржување на супстанциите во обратна фаза на HPLC, a, b се коефициентите на равенката; извршено со користење на софтверот Origin за Windows.

Проценките на вредностите на log P со помош на шеми за адитиви (врз основа на log P зголемувања на молекуларни фрагменти) беа извршени со користење на софтверот ACD и CS ChemDraw Ultra. Карактеристиките на квантитативната проценка на содржината на пестициди во растителните предмети [краставици (замрзнати), слама, класје, жито] беа окарактеризирани користејќи го примерот на три соединенија: диметоат, пиримикарб и малатион. Стандардните раствори на пестициди во ацетон (одделение за реагенс) со концентрација од 0,1 mg/ml (и 0,01 mg/ml за диметоат) беа подготвени со разредување на оригиналните основни раствори со концентрација од 1 mg/ml и додадени што е можно подеднакво ( 1-2,5 ml) во нетретирани (контролни) растителни примероци, проследено со протресување и мешање 5 минути. Отсуството на забележливи пестициди во контролните примероци беше потврдено експериментално со користење на подготовката на примерокот за понатамошна хроматографска анализа беше спроведена на два начина: со LLE (краставици, слама, уши од пченка, жито) и со користење на SPE (краставици). . Подготовката на примероците кои содржат диметоат и малатион е извршена според методот на групно определување на органофосфорни пестициди. Вклучуваше екстракција на пестициди од примероци од краставици со 50% воден ацетон (се користеше ултразвучна бања за да се зголеми ефикасноста на екстракција).

Добиените екстракти беа филтрирани преку хартиен филтер. Филтерската торта беше измиена со 50% воден ацетон. Повторено екстракција на пестициди од воден ацетонски раствор беше спроведено со дихлорометан (три пати по 30 ml секој). Растворите на дихлорометан беа сушени со нивно поминување низ слој од безводен натриум сулфат (аналитичка оценка) и испаруваа до суво во аспиратор на собна температура во млаз воздух. Сувиот остаток беше растворен во 10 ml хексан и хроматографија. Подготовката на примероците што содржат пиримикарб беше извршена со постапката дадена во. Се заснова на екстракција на пестицидот од анализираните предмети со 0,1 N раствор на хлороводородна киселина. Добиените екстракти беа алкализирани со 1 N раствор на натриум хидроксид до pH 8-10 и повторно беа екстрахирани со пиримикарб хлороформ (два порции од 75 ml). Екстрактите од хлороформ беа сушени со нивно поминување низ слој од безводен натриум сулфат и испаруваа до суво во аспиратор на собна температура под млаз воздух. Сувиот остаток беше растворен во 10 ml хексан и хроматографија. Подготовка на примерокот со помош на екстракција на цврста фаза. Пестицидите од анализираните примероци беа екстрахирани со 50% воден ацетон (во ултразвучна бања). По филтрирање на воден ацетонски раствори и миење на филтер колачот (50% воден ацетон), ацетонот од комбинираните екстракти беше целосно испаруван. Останатите водени раствори повторно се филтрираа преку хартиен филтер. Пред употреба на домашни сорбенти Diapak C16 (серија бр. 1002), тие беа активирани (за активирање на касетите, видете став 2.2 погоре). По ова, анализираните водени раствори се испумпуваа низ касетите со брзина не поголема од 2 ml/min, создавајќи вакуум на излезот со пумпа со воден млаз. Касетите потоа се сушат 30 минути во поток на хелиум. Следните растворувачи за елуирање беа хексан (20 ml), дихлорометан (20 ml) и ацетон (15 ml). Елуатите беа испарувани до сушење во аспиратор на собна температура.

Остатоците по испарувањето се растворени во 10 ml хексан и се хроматографија. Гасна хроматографска анализа во комбинирано присуство на диметоат, пиримикарб и малатион беше изведена со помош на уред Tsvet 55OM опремен со термионски детектор и стаклена колона од 2 m x 3 mm исполнета со 5% SP 2100 на Chromosorb W (0,200 -0,250 mm). Температура на колона 220, испарувач 250, детектор 390С. Потрошувачката на носечки гас (азот) е 30 ml/min, водород 14 ml/min, воздух 200 ml/min. Гасна хроматографска анализа на диметоат беше извршена на уред Tsvet 550M со термионски детектор и стаклена колона од 1 m x 3 mm исполнета со 5% SE-30 на Chromaton N Super (0,125 - 0,160 mm). Температура на колона 200, испарувач 240, детектор 320С. Потрошувачката на носечки гас (азот) е 28 ml/min, водород 14 ml/min, воздух 200 ml/min. За дозирање примероци (1 μl) се користеше микрошприц од Хамилтон. Квантитативната проценка на содржината на пестициди во анализираните мостри со помош на методот на надворешен стандард беше извршена според равенката (во сите случаи, анализираните волумени беа исти и изнесуваа 10 ml):

Проценка на параметрите на хидрофобност на потенцијалните органофосфорни пестициди врз основа на нивните индекси на задржување во обратна фаза на течна хроматографија со високи перформанси

Меѓу различните својства на органските соединенија, посебно место заземаат коефициентите на дистрибуција во системот 1-октанол/вода (log P). Овој параметар, предложен како мерка за хидрофобноста на органските соединенија, се користи за различни цели. Еден од нив е предвидување на однесувањето на екотоксикансите во објектите на животната средина. Разгледувањето на познатите податоци за разградувањето на пестицидите во растенијата и почвата укажува на јасно изразена зависност на времетраењето на нивното откривање кај таквите објекти од параметрите на хидрофобноста. На пример, компаративните карактеристики на пиретроидите и органофосфорните пестициди (log P вредностите на пиретроидите се во просек 2-4 единици повисоки отколку за OPP) укажуваат на подолготрајност на пиретроидите во различни култури (1-2 недели подолго), и покрај значителното пониски (неколку пати) стапки на трошоци. Дури и во рамките на една класа на соединенија, јасно е видлива зависноста на времетраењето на регистрацијата на пестицидите во почвата од нивната хидрофобност.

На пример, повеќе хидрофобни OPC (log P 3-4) се откриени 5-15 дена подолго од помалку хидрофобните (log P 1). Покрај проценката и предвидувањето на однесувањето на пестицидите во различни еколошки објекти, вредностите на log P може да се користат како еден од критериумите за избор на нови перспективни производи за заштита на растенијата. Така, се верува дека инсектицидната активност на органофосфорните соединенија, исто така, е во корелација со нивната хидрофобност и, според тоа, вредностите на log P може да бидат корисни во потрагата по нови инсектициди. При спроведување на подготовка на примерок со користење на SPE на модифицирани силика гелови, како што е забележано во прегледот на литературата, голем број автори ја поврзуваат ефикасноста на екстракцијата на пестициди со нивната хидрофобност. Затоа, овој параметар е од интерес не само за карактеризирање на однесувањето на животната средина или за барање нови перспективни пестициди, туку и од аналитичка позиција. Експерименталното определување на log P во системот 1-октанол/вода е поврзано со значителни тешкотии, од кои главна треба да се смета формирањето на бавно одвојувачки емулзии на двата растворувачи еден во друг. Ова води до неразумно долго време за воспоставување рамнотежа, чие отсуство се манифестира во ниската меѓулабораториска репродуктивност на вредностите на log P за многу супстанции (за некои проценки со користење на примерот на пестициди, види). Познати методи за определување на log P може да се поделат во две групи - директни и индиректни.

Директните методи се засноваат на директно мерење на рамнотежните концентрации на супстанциите во двете (или во една, најчесто водена) коегзистирачка фаза. Класичен пример за такви методи е широко користениот метод „колба за тресење“, кој овозможува да се одредат вредностите на log P во опсег од -2,5 до +4,5. Меѓутоа, во голем број случаи, меѓулабораториската репродуктивност на податоците добиени со негова помош достигнува ± 1,3 log P единици. Другите методи за одредување на log P или одземаат многу време или бараат употреба на специјална опрема. Тешкотиите за директно мерење на вредностите на log P доведоа до појава на голем број индиректни методи за нивно проценување. Некои од нив се засноваат на пресметката на log P со помош на адитивни шеми (врз основа на log P зголемувања на молекуларни фрагменти, вклучително и користење на модерен софтвер (ACD или CS ChemDraw), други вклучуваат употреба на двопараметарски линеарни регресивни равенки на формата ( 8), чии коефициенти се пресметани со методот на најмали квадрати на множества на податоци за претходно карактеризирани супстанции:

Параметрите А ги вклучуваат и молекуларните карактеристики - поларизација (молекуларна рефракција), потенцијал на јонизација, диполен момент и некои физичко-хемиски константи - точка на вриење, растворливост во вода (само во хомологни серии), како и експериментално утврдени параметри за задржување во обратна фаза HPLC ( обично се користат логаритми на фактори на задржување или фактори на капацитет log k1). И покрај големиот број примери за карактеризирање на хидрофобноста на сорбатите користејќи log k вредности (HPLC), хроматографските непроменливи, како што се индексите на задржување, кои се помалку зависни од условите на сепарација отколку коефициентите на капацитет, досега не се користени за овие цели.

Споредба на надворешни стандардни и стандардни адитивни методи за проценка на содржината на пестициди во растителни објекти

Проценката на нивото на содржината на пестициди во растителните објекти е клучен и последен чекор во одредувањето на трагите на екотоксиканти. Прегледот на литературата забележа дека за таа цел се користат два методи на квантитативна хроматографска анализа: најпопуларен е методот на надворешен стандард (вид на апсолутна метода на калибрација) и методот на внатрешен стандард. Широката употреба на методот на надворешен стандард веројатно се должи на едноставната процедура за одредување.

Се состои од анализа на раствори на стандардот и примерок добиен од целниот примерок со дополнително определување на концентрацијата на пестицидот според пропорцијата: каде што Cx, Cst. - концентрација на аналитот во тестот и стандардните раствори; Mx, Мет. - количината на аналит во тестот и стандардните раствори (ако нивните волумени се еднакви); Рх, Рст# - плоштина (висина) на врвот на аналитот во тестот и стандардните раствори Проценката на случајната компонента на грешката во резултатите од квантитативното определување со методот на надворешен стандард се врши според односите: каде 5СХ , 5Сст., - грешки при определување и поставување на концентрациите на пестицидот во анализираните и стандардните раствори; 5MX, 8MST. грешки при определување и поставување на количините на пестициди во анализираните и стандардните раствори (ако нивните волумени се еднакви); 8РХ, SPSCT. - грешки при определување на површините (висини) на врвови на пестициди во тестот и стандардните раствори. Меѓутоа, во различни фази на подготовка на примерокот за хроматографска анализа, може да се забележат значителни загуби на пестициди, што доведува до намалување на нивната концентрација во финалниот тест раствор, а како последица на тоа, до потценети резултати од определувањето. Прегледот на литературата, исто така, забележа дека методот на внатрешен стандард овозможува да се намали влијанието на систематската грешка врз конечните аналитички резултати. Неговата предност во овој случај би била непобитна доколку нема потешкотии во изборот на внатрешни стандарди. Во исто време, овој тип на интерен стандарден метод како стандарден адитивен метод сè уште не најде своја примена за проценка на содржината на пестициди во растителни (и други) објекти. Овој метод вклучува користење на соединението што треба да се одреди како внатрешен стандард. За да се утврди неговата содржина во примерок (Cx), потребно е да се анализираат два примерока: почетен примерок и примерок по воведување на позната количина на стандарден додаток во него.

Со користење на едноставна пропорција (ако анализираните волумени се еднакви), поврзувајќи го зголемувањето на хроматографскиот сигнал со додавањето на тест соединението, се одредува неговата почетна содржина во мострата: одредената количина на аналитот во оригиналната мостра; MDOB. -додавање на споредбен примерок; Rx, Rx + Додај. - површина (висина) на врвовите на аналитот во примероците што одговараат на оригиналниот примерок и примерокот со додатокот, t - масата на оригиналната мостра, V - волуменот на анализираната мостра. Случајната грешка на резултатите од квантитативните определувања (5МХ) со примена на стандардниот метод на адитив (кај 8МДБ „СП и СВ“ 8 МДБ.) може да се процени со релацијата: каде 8РХ, 8Рх+ДБ - грешки при определување на површините (висини ) на врвовите на аналитите во оригиналната мостра и примерокот со адитивот . Споредбата на изразите (15) и (16) покажува дека случајната компонента на грешката во одредувањето со користење на стандардниот метод на собирање на Px Px+ext ќе биде поголема отколку со користење на надворешниот стандарден метод бидејќи (Px+Add / (Px+add - Px) » 1, но при Px + додадете » Px и, според тоа, Px + додадете / (Px + Додај - Px) " 1 тие се споредливи по големина. Покрај тоа, неговиот дополнителен извор е двојно зголемување на бројот на експериментални операции за време на подготовката на примерокот. Меѓутоа, намалувањето на влијанието на систематската грешка при користење на стандардниот метод на додавање (како и во методот на внатрешен стандард), по правило, овозможува значително да се намали вкупната грешка при одредувањето. Времето поминато на извршувањето на хроматографските определби со помош на надворешниот стандард и стандардните методи на додавање е приближно исто.Меѓутоа, бројот на операции за подготовка на примерокот при користење на стандардниот метод на додавање се удвојува

Кочмола, Николај Максимович

Пронајдокот се однесува на екологијата, имено на метод за истовремено одредување на пестициди од различни хемиски класи во биолошки материјал. За да го направите ова, рибниот црн дроб се хомогенизира со безводен натриум сулфат и натриум хидроген цитрат, извлечен со ацетонитрил, протресен и таложен. Потоа, примероците се центрифугираат на 3000 вртежи во минута и се додаваат сорбенти - силика гел C-18, Bondesil-PSA и безводен натриум сулфат, по што се повторува центрифугирањето. Добиениот раствор се испарува, сувиот остаток се раствора во ацетонитрил и се анализира со помош на HPLC со УВ детектор. Пронајдокот овозможува да се процени нивото на контаминација со пестициди на биолошките објекти при мониторинг на животната средина. 2 бол., 4 ав.

Пронајдокот се однесува на полето на хемијата на животната средина и може да се користи за заедничко определување на пестициди од различни хемиски класи во еден примерок.

Проблемот со загадувањето на животната средина со пестициди се појави во средината на 50-тите години на 20 век, кога производството и употребата на овие супстанции стана широко распространето. Пестицидите како екотоксикаси секоја година имаат се позабележително влијание врз дивиот свет и здравјето на луѓето.

Пестицидите кои се користат во земјоделството, во растворена и цврста форма, се внесуваат во водите на реките и морињата, каде што се седиментираат во долните седименти или се разредуваат во водната маса. Загадувањето на водните тела со пестициди и производи од нивно распаѓање е многу опасно за нивното нормално биолошко функционирање. Со рационална употреба на хемикалии во земјоделството, минимална количина на лекови завршува во водните тела.

И покрај релативно ниските концентрации во водата и седиментите на дното, пестицидите можат доста интензивно да се акумулираат во виталните органи и ткива на водните организми, особено кај рибите, како највисока трофичка алка во водните екосистеми. Пестицидите влегуваат во телото на рибата главно осмотски преку жабрите и делумно преку кожата, преку прехранбените производи и се дистрибуираат низ сите органи и ткива, концентрирајќи се во најголеми количини во внатрешните органи (црн дроб, бубрези, цревни ѕидови, слезина). Бидејќи пестицидите имаат тенденција да се раствораат и акумулираат во мастите, тие речиси никогаш не се излачуваат од телото. Па дури и мало, но постојано снабдување со пестициди доведува до зголемување на нивната концентрација во резервите на маснотии на рибите.

Задачата да се идентификуваат непознати супстанции, но збир на соединенија од целата листа на пестициди што се користат во практиката, чиј број надминува 1000 имиња, е најтешка.

Постојните светски методи за одредување на содржината на пестициди во рибите (QuEChERS) сè уште не нашле широка употреба во истражувањето и примената. Пестицидите се определуваат главно со употреба на гасно-течна хроматографија со масовно спектрометриско детекција (GC-MS), каде идентификацијата на пестицидите се врши со користење на претходно генерирана библиотека на масни спектри. Стапката на развој на HPLC за одредување на остатоци од пестициди во моментов е речиси 2 пати повисока од стапката на развој на гасно-течна хроматографија.

Течна хроматографија со високи перформанси (HPLC) е еден од најинформативните аналитички методи. Широко се користи во сите развиени земји, но, во споредба со другите физичко-хемиски методи на анализа, бара многу висококвалификуван персонал, а цената на една анализа достигнува неколку десетици, па дури и стотици американски долари. Така, поедноставувањето на самата процедура за анализа на HPLC и намалувањето на нејзината цена се чини дека е важна задача.

Овие недостатоци на HPLC се должат на фактот дека за секој пестицид (или група пестициди) регулаторните документи ја регулираат сопствената „уникатна“ верзија на HPLC анализата. Ова доведува до потреба од често обновување на хроматографот, што одзема многу време и бара одредено искуство. Покрај тоа, аналитичка лабораторија која врши анализи користејќи многу различни методи е принудена да одржува цел магацин со скапи столбови, органски растворувачи и стандардни примероци на пестициди.

Пестицидите утврдени во светската практика со HPLC вклучуваат ниско испарливи и термолабилни соединенија. Дополнително, HPLC овозможува заедничко определување на пестицидите и нивните метаболити. При анализата на пестицидите со HPLC особено се важни методите за подготовка на примероци.

Постои познат метод за одредување на OCP во месото, производите од месо и рибата, кој се состои во минување на месото и производите од месо низ мелница за месо. Рибата се чисти од лушпите и внатрешните органи, а исто така поминува низ мелница за месо. 20 g од мострата се мешаат со безводен натриум сулфат и се ставаат во колба со мелен затворач. Пестицидите се екстрахираат двапати со мешавина од хексан-ацетон или нафтен етер-ацетон во сооднос 1:1 во делови од 50 ml за 1,5 часа со тресење. Екстрактот се филтрира низ инка со хартиен филтер исполнет 2/3 со безводен натриум сулфат, потоа растворувачот се дестилира, сувиот остаток се раствора во 20 ml n-хексан и се додава во колона од силика гел ASA. Откако екстрактот се апсорбира во сорбентот, пестицидот се елуира со 110 ml мешавина од бензен и хексан во сооднос 3:8 во делови од 25-30 ml. Елуатот се собира во колба со тркалезно дно со мелен пресек со капацитет од 250-300 ml. 10 минути откако ќе се апсорбира последниот дел од растворувачот, сорбентот се истиснува со помош на круша. Елуатот се дестилира до волумен од 0,1 ml и се нанесува на хроматографска плоча. Ако примероците од месо или риба содржат голема количина маснотии, по испарувањето на првиот екстракт (мешавина од ацетон со хексан) и растворање на сувиот остаток во хексан, екстрактот од хексан треба да се прочисти со сулфурна киселина, а потоа да се прочисти колоната како опишано погоре (www. bestdravo.ru Упатства за определување на органохлорни пестициди во вода, храна, добиточна храна и тутунски производи со тенкослојна хроматографија. Одобрено од заменик-главниот државен санитарен доктор на СССР А.И. Заиченко на 28 јануари 1980 година бр. 2142 -80. Текст на документот заклучно со јули 2011 година).

Недостаток на овој метод е неговата мала чувствителност, сложеност и времетраење на анализата.

Познат е и „Методот за одредување тетраметилтиурам дисулфид во биолошки материјал“ (RF патент бр. 2415425, IPC G01n 33/48, 2009 година), во кој биолошкото ткиво се дроби и се третира двапати со етил ацетат за 30 минути. со тежина 2 пати повеќе од ткивото, филтрација со безводен натриум сулфат, испарување на растворувачот, растворање на остатокот во ацетонитрил разреден со вода во сооднос 1:4. Потоа, примерокот се екстрахира двапати со делови од хлороформ, екстрактите се комбинираат, испаруваат, остатокот се раствора во мобилната фаза хексан-диоксан-пропанол-2 (15:5:1 по волумен), прочистен во колона со силициум диоксид. гел L 40/100µ со користење на мобилната фаза, фракцијата на елуат што го содржи аналитот се комбинираат, елуентот се испарува, остатокот се раствора во мобилната фаза и се одредува со HPLC со детекција на УВ.

Најблизок по техничка суштина и постигнат ефект до предложениот метод (прототип) е „Метод за одредување на тиоклоприд во биолошки објекти со помош на HPLC“ (RF патент бр. 2517075, IPC G01n 30/95, 2012). Методот се состои од земање мостри, екстракција, филтрација, дехидрација на натриум сулфат со безводен, испарување, внесување на растворениот сув остаток во течен хроматограф, обработка на резултатите од анализата и како примерок, измерен дел од животински органи или ткива со тежина се зема од 50 до 200 mg, се врши екстракција со ацетон, растворениот сув остаток се додава во течен хроматограф „Khromos-ZH301“ со спектрофотометриски детектор UVV104M, колона Diasfer-NOS-16(150×4)mm со се користи сорбентна пора со големина од 5 микрони, ацетонитрил-вода смеса се користи како елуент во сооднос 30:70.

Двата опишани методи овозможуваат да се одреди само еден пестицид во биолошки материјал.

Техничката цел на предложениот пронајдок е да обезбеди заедничко определување на неколку пестициди во еден примерок преку зголемување на чувствителноста на методот.

Техничкиот проблем е решен со тоа што методот за одредување на пестициди во биолошки материјал со помош на HPLC вклучува земање примероци, екстракција со органски растворувач, испарување, растворање на сувиот остаток и негово внесување во хроматограф, обработка на резултатите од анализата; како примерок се зема примерок од риба црн дроб, хомогенизиран со безводен натриум сулфат и натриум хидроген цитрат, екстрахиран со ацетонитрил, протресен и таложен, потоа се центрифугира на 3000 вртежи во минута и се додаваат сорбенти - силика гел C18, Bondesil-PSA и безводен натриум сулфат, по која центрифугирање беше повторена, сувиот остаток беше растворен во ацетонитрил, а потоа анализиран со помош на HPLC со УВ детектор.

Техничкиот резултат на пронајдокот е да се обезбеди заедничко определување на неколку пестициди во еден примерок со зголемување на чувствителноста на методот.

За влијанието на карактеристичните карактеристики на техничкиот резултат.

1. Употребата на примерок од рибен црн дроб, како орган кој во најголема мера акумулира токсанти, доведува до најточно квантитативно определување резултат. Црниот дроб игра важна улога во детоксикацијата на штетните материи, а високата содржина на масти доведува до акумулација на липофилни материи во него, кои вклучуваат пестициди од новата генерација.

2. Хомогенизирањето на примерокот на црниот дроб со безводен натриум сулфат и натриум хидроген цитрат ефикасно ја исцедува примерокот од вишокот на влага и одржува константна pH вредност.

3. Ацетонитрилот е многу силен и речиси универзален екстракт кој обезбедува добра екстракција на целиот сет на анализирани супстанции. Маснотиите на црниот дроб, кои го попречуваат хроматографското определување, многу тешко се раствораат во ацетонитрил, што исто така доведува до зголемување на бројот на откриени пестициди.

4. Центрифугирање извршено двапати на 3000 вртежи во минута. ви овозможува најдобро да го одделите екстрактот од честички на сорбенти, натриум сулфат и вишок маснотии користејќи едноставна декантација без употреба на филтрација, што овозможува да се зголеми чувствителноста на методот.

5. Употребата на силика гел-C18, Bondesil-PSA и безводен натриум сулфат како сорбенти обезбедува висококвалитетно прочистување на екстрактот од липиди, масни киселини, пигменти и други мешачки нечистотии.

6. Конечно, HPLC со УВ детектор има висока точност на детекција.

Така, комбинацијата на карактеристични карактеристики на опишаниот метод обезбедува постигнување на наведениот резултат, имено заедничко определување на неколку пестициди од различни класи во еден примерок со зголемување на чувствителноста.

Како резултат на анализата на нивото на технологијата, не беше пронајден аналог кој се карактеризира со карактеристики идентични со сите суштински карактеристики на тврдениот пронајдок, а идентификацијата на прототип од постоечките аналози овозможи да се идентификува збир на карактеристични карактеристики кои се од суштинско значење во однос на техничкиот резултат.

Следствено, тврдениот пронајдок го исполнува условот за патентност на „новина“.

При дополнително пребарување за други решенија поврзани со предложениот метод, овие карактеристични карактеристики не беа пронајдени.

Така, тврдениот пронајдок го исполнува условот за патентација на „инвентивен чекор“.

Методот се изведува на следниов начин.

Примерокот од рибиниот црн дроб е хомогенизиран со безводен натриум сулфат и натриум хидроген цитрат. Потоа се додава ацетонитрил и се таложи по силно протресување. По ова, смесата се центрифугира на 3000 вртежи во минута, ацетонитрилниот слој се исцеди и се додаваат сорбенти (силика гел C18, Bondesil-PSA и безводен натриум сулфат), се протресува и се таложи. По таложење, центрифугирањето се повторува, ацетонитрилниот слој се исцеди и се концентрира до суво на температура не поголема од 50°C. Сувиот остаток се раствора во ацетонитрил и се анализира на HPLC со УВ детектор.

Примери за имплементација на методот.

Пример 1. 5 g црн дроб од риба (кепен) е хомогенизиран во епрувета од 50 dm3 со 10 g безводен натриум сулфат и 0,6 g натриум хидроген цитрат. Потоа се додаваат 8 dm 3 ацетонитрил и по силно протресување 1 минута, се задржува 30 минути.

По ова, смесата се центрифугира 5 минути на 3000 вртежи во минута, ацетонитрилниот слој се истура во епрувета со волумен од 15 dm 3 и 50 mg сорбент Bondesil-PSA, 50 g сорбент C18 и 1,2 g безводен натриум. се додаваат сулфати, силно се протресува 1 минута и се остава 30 минути. Потоа смесата повторно се центрифугира 5 минути на 3000 вртежи во минута, ацетонитрилниот слој се истура во колба од 100 ml и се концентрира до волумен од 1 ml на вакуумски концентратор на температура од 40 °C.

Растворувачот и сувиот остаток беа растворени во 1 cm 3 ацетонитрил и анализирани на течен хроматограф од Applied Biosystems (САД) со ултравиолетовиот детектор опремен со дегазиран и термостат за колона. Колона 4,6×150 mm Reprosil-PUR ODS-3,5 µm (Елсико, Русија); работна бранова должина - 230 nm, контрола на температурата - +40°C; мобилна фаза: ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорна киселина во сооднос 60:40 (по волумен) во изократски режим; брзината на проток е 0,6 ml/min, волуменот на екстрактот од примерокот внесен во хроматографот е 10 µl. Пестицидите беа идентификувани според времето на задржување.

Квантитативната содржина беше одредена врз основа на површината на хроматографскиот врв со помош на равенката на графикот за калибрација.

Како резултат на тоа, беа откриени следните пестициди (mg/kg): 1-имазалил 1,1014; 2-имазапир 0,8996; 3-имидаклоприд 0,596; 4-имазетапир 0,6776; 5-ципросулфамид 0,9136; 6-метрибузин 0,7294; 7-флумиоксазин 1,3232; 8-хисалофоп-Р-етил 0,7704; 9-етофумесат 1,2012; 10-ипродион 1,1248; 11-димоксистробин 1,4122; 12-фамоксадон 3,925; 13-пенцекурон 3,0524.

На сл. Слика 1 покажува хроматограм на мешавина од пестициди пронајдени во примерокот (пример 1), на сл. 2 е пример на графикон за калибрација за еден од пестицидите (имазапир). Калибрациона равенка Y=0.377192X.,

Пример 2. Слично на примерот 1, анализата беше спроведена без прелиминарна хомогенизација на примерокот на црниот дроб. Како резултат на тоа, беа откриени приближно 50% помалку пестициди отколку во примерот 1, што се објаснува со потребата од хомогенизација за да се зголеми степенот на екстракција.

Пример 3. Слично на примерот 1, повторената центрифугирање беше исклучена.

Како резултат на тоа, примерокот беше контаминиран и стапката на обновување на пестицидите се намали. Бидејќи сорбентите беа внесени во примерокот по првата центрифугирање, беше формирана суспензија, која мораше да се отстрани со повторена центрифугирање.

Пример 4. Слично на примерот 1, ја исклучивме употребата на сорбент со силика гел C18. Како резултат на тоа, количината на откриени супстанции малку се намали, но се појавија артефакти.

Така, експериментите покажуваат дека примерот 1 е оптимален; опишаната низа на дејства со примерок од црн дроб со користење на гореспоменатиот ацетонитрил како естрант и збир на сорбенти овозможува да се идентификува најголемиот број на пестициди.

Предложениот метод, во споредба со прототипот, е поедноставен, поекономичен и поефективен, бидејќи ви овозможува да одредите 10-13 пестициди во еден примерок наместо еден.

Методот може да го користи Роспотребнадзор за следење на контаминација со пестициди на биолошки објекти, еколошки организации и во истражување и развој.

Метод за одредување на пестициди во биолошки материјал со помош на HPLC, вклучувајќи земање мостри, екстракција со органски растворувач, испарување, растворање на сувиот остаток и негово внесување во хроматограф, обработка на резултатите од анализата, се карактеризира со тоа што се зема примерок од црн дроб од риба како примерок и хомогенизиран со безводен натриум сулфат и натриум хидроген цитрат, потоа екстрахиран со ацетонитрил, протресен и таложен, потоа центрифугиран на 3000 вртежи во минута и додадени сорбенти - силика гел C-18, Bondesil-PSA и безводен натриум сулфат, по што се повторува центрифугирањето. сувиот остаток се раствора во ацетонитрил и се анализира со помош на HPLC со УВ детектор.

Слични патенти:

Пронајдокот се однесува на аналитичката хемија и се однесува на метод за одредување на селен во вода. Суштината на методот е во тоа што во анализираниот раствор се додава 0,4 ml раствор од 3% алкален натриум борохидрид, се затвора со затворач, се протресува и се остава 5 минути за да се намали селенот до водород селенид.

Пронајдокот се однесува на полето на недеструктивно тестирање на материјали и производи според цврсти услови и е наменет да го контролира процесот на формирање на пукнатини на кревки мерачи на деформација кога нивото на напрегање се менува во проучуваните области на структурата.

Пронајдокот се однесува на полето на биохемијата и се однесува на метод за добивање на аналитички тест систем (MRM тест) за мултиплексна идентификација и квантитативно мерење на содржината на протеини од интерес во биолошки примерок врз основа на содржината на нивните соодветни протеотипски маркерски пептиди, вклучувајќи идентификација на протеотипски маркерски пептидни секвенци единствени за протеинот; избирање на најмалку две маркерни протеотипски пептидни секвенци на протеинот; предвидување на фрагменти од пептид; предвидување на МРМ тестот во форма на листа на маркерски пептиди, нивни фрагменти и најдобри параметри за детекција; синтеза на маркер пептиди; определување на преодниот профил на синтетички маркерски пептиди; оптимизација на MRM тестот во согласност со добиените профили; прочистување на пептиди; подготовка на биолошки примерок; идентификација на протеин во биолошки примерок со инјектирање на синтетички пептиди; определување на вредностите на времето на задржување за маркерските пептиди со внесување на утврдените вредности во тестовите на МРМ; извршување на мултиплекс калибрациски мерења; квантитативно мерење на содржината на маркерните пептиди во биолошки примерок; и проценка за изобилството на протеини од интерес во биолошки примерок.

Пронајдокот се однесува на аналитичката хемија, имено на метод за одредување на микронечистотии на арсен и антимон во лековити растителни материјали. Методот вклучува претворање на соединенијата на арсен и антимон во соодветните хидриди со редукција со мешавина која содржи 40% раствор на калиум јодид, 10% раствор на аскорбинска киселина, 4 М раствор на хлороводородна киселина и метален цинк.

Групата пронајдоци се однесува на областа на екологијата и воздушната опрема и е наменета за мерење на квалитетот на воздухот. За да се измери квалитетот на воздухот, воздухот се зема мостри со првата стапка на земање примероци за да се добие мноштво примероци за квалитетот на воздухот со помош на првиот сензор.

Пронајдокот се однесува на судската медицина, имено на определувањето на употребата на оружје со мазна дупка за нанесување повреди од огнено оружје. Предложениот метод вклучува изолирање на честичките на бариера, нивно визуелно проучување, ставање на изолираните честички на стаклен тобоган во 2-3 капки дестилирана вода, кога се загрева до температурата на топење на парафинот, се формира проѕирен тенок филм на површината на водата, а кога ќе се оладат, формираните парчиња ги добиваат своите првобитни физичко-механички карактеристики.својства на парафинот, што укажува на употреба на оружје со мазна дупка за нанесување штета од огнено оружје.

Пронајдокот се однесува на полето на фундаменталната физика и може да се користи во проучувањето на термофизичките својства на суперфлуидните квантни течности. Термопаровите платина-платина-родиум 1 и 2 се потопени во топење на чист борен анхидрид 5.

Пронајдокот се однесува на полето на океанологијата, особено сеизмологијата и хидробиологијата и може да се користи за брза проценка на зголемената геофизичка активност во морските области што доведува до земјотреси.

Пронајдокот се однесува на полето на екологијата, имено на проценка на квалитетот на атмосферскиот воздух во населените области врз основа на состојбата на епифитната флора на лишаи. За да го направите ова, пресметајте го индексот на загаденост на воздухот (API) врз основа на виталноста на лишаите во рамките на 89%, споредувајќи го со комплексен индикатор утврден на местото на регистрација и коефициентот на толеранција на флората на лишаите во однос на индексот на загаденост на воздухот, кој се пресметува со користење на формулата API = (0,89- G/89)/0,298, каде што 0,89 е максималната релативна виталност на флората на лишаите во чист воздух; G% е комплексен индикатор за виталноста на флората на лишаите на местото на индикација на лишаите; 89% е теоретски можната максимална вредност на виталноста на флората на лишаите во чист воздух, изразена како процент; 0,298 - коефициент на толеранција на лишајната флора кон ИЗА. Вредноста на IZA е околу 1 и присуството на сите видови лишаи укажува на поволна еколошка состојба и квалитет на воздухот; кога се оценува во рамките на 5-6 единици, се проценува зголемено загадување; резултат од 7-13 го карактеризира високото загадување; оценката над 14 укажува на многу високо загадување. Пронајдокот овозможува да се изврши проценка на животната средина и да се изведе просечниот годишен индикатор за загадување на воздухот. 1 таб., 1 пр.

Пронајдокот се однесува на екотоксикологијата, имено на проучувањето на развојот на оксидативниот стрес кај бивалвните мекотели и може да се користи за да се идентификува влијанието на техногеното загадување на животната средина врз состојбата на популациите на речните и морските мекотели. За да го направите ова, примероците од хепатопанкреасот на бивалвните мекотели од загадените водни тела се хомогенизираат во 10-кратен волумен од 50 mM Tris пуфер, pH 7,8, кој содржи 2 mM етилендиаминтетроацетат. Малондиалдехид (MDA) и 4-хидроксиалкени потоа се анализираат за да се одреди нивото на липидна пероксидација. Состојбата на мекотелите се проценува со одредување на нивото на оксидативно оштетување на липидите на хепатопанкреасот во споредба со контролните примероци земени од релативно чисти водни тела. Пронајдокот овозможува да се детектираат, во различни фази на интоксикација, нарушувања во метаболичката рамнотежа на клетките предизвикани од дејството на загадувачите во водната средина. 3 бол., 3 ав.

Пронајдокот се однесува на мерење на квалитетот на различни видови комплекси на треви и тревни растенија во примероци, главно во поплавни ливади, и може да се користи за следење на животната средина на области со тревна покривка. Пронајдокот се однесува и на пејзажи на мали реки со ливадска вегетација и може да се користи при проценка на разновидноста на видовите на тревата со присуство на поединечни растителни видови. Методот вклучува идентификување, визуелно на карта или на самото место, дел од поплавната ливада со тревна покривка на мала река или нејзина притока, означување во овој дел по текот на мала река или нејзина притока на карактеристични места најмалку три хидрометриски пресеци во попречен правец. По секоја мерна станица, местата за примероци се означени на секоја страна од малата река или нејзината притока. Се откриваат шеми на индикатори на примероци од трева. За да се пресмета разновидноста на тревни растителни видови во поплавинска ливада област, се идентификуваат точките на идните центри на комплексни места за тестирање. Во секој центар на сложените локации за тестирање, штипки се забиваат и концентрично се поставуваат квадратни рамки со различни странични големини. Квадратни рамки се инсталирани со страни ориентирани долж и преку коритото на мала река или нејзина притока. Бројот на видови трева во секоја квадратна рамка потоа се брои и евидентира во табели за секоја големина на примерокот. По ова, за секоја табела се пресметуваат збировите на тревните видови и примероците. Од овие збирови се пресметуваат соодносите на вкупниот збир на тревни видови и на вкупниот збир на сите сложени примероци парцели. Потоа, со користење на статистичко моделирање, се идентификуваат ранг распределбите според два индикатора: релативната појава на секој тип трева на сите парцели за примероци и разновидноста на видовите трева на секоја парцела примерок на дадена локација, по што се добива коефициентот на корелативна варијација во се пресметува бројот на тревни видови, а проценката на видниот состав на тревни растенија се врши според рангирана дистрибуција на релативна појава на растителни видови. Методот обезбедува зголемување на точноста на евидентирање на присуството на видови тревни и тревни растенија на сите парцели за примероци, истовремено намалувајќи го интензитетот на трудот на анализа на составот на видовите на нив, поедноставувајќи го процесот на анализа на составот на видовите само со бројот на видови на примероците, зголемувајќи ја способноста за споредување примероци од трева според два индикатора: релативната појава на секој вид на сите парцели за примероци и разновидноста (релативната појава) на видовите трева на секоја парцела примерок на дадена локација, без отсекување примероци од трева од примероците. 7 плата f-ly, 6 ill., 11 табели, 1 pr.

Пронајдокот се однесува на аналитичката хемија и може да се користи за определување на диоктил фталат во рамнотежната гасна фаза над производите направени од PPC пластизол. За таа цел, се користи метод за идентификација и полуквантитативно определување на диоктил фталат во мешавина на соединенија ослободени од ПВЦ пластизол. За одредување на диоктил фталат, се користи фреквентен мерач со низа од 2 пиезокварцни резонатори со природна фреквенција на вибрации од 10 MHz, чии електроди се модифицираат со примена на повеќеѕидни јаглеродни наноцевки (MWCNTs) со тежина на филм од 3-5 μg и полифенил етер (PPE) со тежина од 15-μg на нив од поединечни раствори.20 mcg. Модифицираните пиезокварцни резонатори се ставаат во затворена ќелија за детекција и се чуваат 5 минути за да се воспостави стабилен нулта сигнал. Потоа примерок од мек ПВЦ пластизол производ со тежина од 1,00 g се става во семплерот, цврсто се затвора со затворач и се чува на температура од 20±1°C 15 минути за да се засити гасната фаза со пареа на диоктил фталат. Со шприц се земаат 5 cm3 од гасната фаза на рамнотежа и се инјектира во затворена ќелија за детекција, а промената на фреквенцијата на осцилација на пиезоелектричните сензори се евидентира за 120 секунди. Одговорите на сензорот автоматски се снимаат секоја секунда, по што системот се регенерира 2 минути со сув воздух. Потоа примерокот во семплерот се загрева во кабинет за сушење на 30±1°C 10 минути, 5 cm3 од рамнотежната гасна фаза се земаат со шприц и повторно се инјектира во затворена ќелија за откривање, а промената на фреквенцијата на осцилација на пиезосензорите се снимаат 120 секунди на 20 и 30°C. Врз основа на сигналите од сензорот, областите под кривата автоматски се пресметуваат за секој сензор: S(MWCNT), S(PFE), Hz·s, а односот на областите на 20°C и 30°C, соодветно, е пресметано - параметар. Врз основа на наведените параметри, се извлекуваат заклучоци за присуството на диоктил фталат во примероците: ако A30/20>20, тогаш диоктил фталат е присутен во примероци од производи од ПВЦ пластизол со концентрација поголема од дозволената количина на миграција (DKM, mg/dm3), ако A30/20≤1, тогаш содржината на диоктил фталат е на ниво на дозволената количина на миграција и неговата содржина е помала од содржината на другите високо испарливи соединенија присутни во примерокот. Пронајдокот обезбедува идентификација и полуквантитативно определување на диоктил фталат ослободен од ПВЦ пластизол. 1 ул.

Пронајдокот се однесува на полето на третман на воздух. Методот за калибрирање на сензор за воздух на уред за третман на воздух ги вклучува чекорите на: i) прочистување на воздухот со помош на уредот за третман на воздух; ii) - мерење на првата количина воздух со помош на сензор за воздух за да се добие првата вредност за калибрирање на сензорот за воздух, при што првата количина на воздух е мешавина од амбиентален воздух и прочистен воздух, при што управувачот за воздух се наоѓа во херметички простор , а чекор 2 понатаму ги вклучува чекорите , во кои: се утврдува дали квалитетот на првата количина воздух во херметичкиот простор задоволува даден критериум; и ако квалитетот на првата количина воздух задоволува однапред одреден критериум, мерење на првата количина на воздух со помош на воздушен сензор за да се добие првата вредност. Ова овозможува да се зголеми точноста на мерењата и, како резултат на тоа, да се оптимизира работата на управувачот со воздух. 2 n. и 9 плата f-ly, 3 ill.

Пронајдокот се однесува на полето на аналитичката хемија за определување на амини во безводни медиуми. За да се направи ова, анализираниот примерок кој содржи амини се раствора во ацетонитрил со додавање на 0,01 до 1 mol/l инертна сол, електрода со облога претходно нанесена на неа со дебелина од 10 nm до 10 μm, која се состои од полимер комплекси на преодни метали со Шифови бази, се потопува. , и снима волтамограм во потенцијалниот опсег, вклучувајќи потенцијали од -0,2 до 1,2 V, со брзина на скенирање во опсег од 5-1000 mV/s, што се споредува со референтната волтамограми на познати амини и од нив амини слични на референтниот примерок се идентификувани во анализираната мостра со помош на хроноамперометриски метод со помош на криви на калибрација. Тетраетиламониум тетрафлуороборат или амониум тетрафлуороборат се користи како инертна сол. Пронајдокот може да се користи во хемиската, фармаколошката, медицинската и прехранбената индустрија за квалитативна и квантитативна анализа на амини. 2 плата f-ly, 9 ill., 4 ave.

Пронајдокот се однесува на методи за одредување на составот и количеството на компонентите вклучени во природните минерали и соединенијата добиени во различни хемиски реакции под дејство на температура и притисок. Методот за одредување на концентрацијата на лантан манганит во мешавина од синтетизиран прав на системот La(1-x)SrxMnO3, добиен со мешање на почетните компоненти во форма на прашоци La2O3, MnCO3 и SrCO3 и нивна последователна синтеза, вклучува одредување на рефлексија на прашок од лантан манганит во видливиот регион на спектарот на бранова должина од 546 nm. Вредноста на концентрацијата на лантан манганит, што одговара на одредена вредност на рефлексијата во видливиот регион на спектарот на бранова должина од 546 nm, е одредена од зависноста од калибрација претходно конструирана за различни синтетизирани прашоци од лантан манганит од Ла 1-x) SrxMnO3 систем според податоците од анализата на фазата на Х-зраци кои ја одредуваат концентрацијата на лантан манганит и вредностите на рефлексија во видливиот регион на спектарот на бранова должина од 546 nm. Техничкиот резултат е да се одреди концентрацијата на лантан манганит за прашоци добиени под различни услови. 4 лошо, 1 таб., 7 пр.

Пронајдокот се однесува на медицината, имено на онкологијата, и може да се користи за предвидување на текот на умерено диференцираните ендометриоидни карциноми на телото на матката T1N0M0. Методот го вклучува следново. Кога големината на примарниот тумор е во рамките на 1 cm, се одредуваат клетките на туморот на матката кои изразуваат Ki-67, топоизомераза 2 алфа, се пресметува односот на топоизомераза 2 алфа/Ki-67 и ако коефициентот е помал или еднаков на 0,8 , поволен исход се предвидува без адјувантна терапија. Доколку коефициентот е поголем од 0,8, се предвидува неповолен тек на болеста и се препорачува адјувантна терапија. Употребата на пронајдокот овозможува да се зголеми точноста и содржината на информации за прогнозата на текот на умерено диференцираните ендометриоидни карциноми на матката. 1 таб., 2 пр.

Пронајдокот се однесува на фармацевтски производи, имено на квантитативно определување на деривати на имидазол незаменети во 5-позицијата, имено хистидин хидрохлорид, хистамин дихидрохлорид, клотримазол, тиамазол, озагрел, бифоназол во лековите супстанции. За подготовка на растворите за испитување, точниот волумен на раствор од ампули од 4% хистидин хидрохлорид (1 ml) се става во колба од 25 ml во 10 ml прочистена вода, се меша и се прилагодува на ознаката со истиот растворувач; прецизно измерен волумен од 0,1% хистамин дихидрохлорид (1 ml) или прецизни измерени количини на клотримазол (околу 0,1 g), тиамазол (околу 0,005 g), озагрел (околу 0,01 g), бифоназол (околу 0,005 g) се става во мене. ml колбите се раствораат во метанол на собна температура додека целосно не се растворат, а потоа волуменот на колбите се прилагодува на ознаката со истиот растворувач. Потоа, во волуметриски колби од 20 ml, прецизно изберете 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0 ml од подготвениот раствор на хистидин хидрохлорид и клотримазол, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0 ml раствор на хистамин .2.5,0, 2.5,0, , 3,5, 4,0 ml раствор на тиамазол, 1,0, 1,5, 2,0, 2 секој ,5, 3,0 ml раствор на озагрел и 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0 ml раствор на бифоназол. Во секоја колба се додава 5,5 ml раствор од дијазотизиран р-анизидин во хлороводородна киселина и се разредува до ознаката со метанол, се појавува боја. Светло-црвените раствори добиени по 2-3 минути се стабилни 2 часа. Примероците фотоелектроколориметриски се мерат на бранова должина од 490 nm и во кивет со дебелина од 10 mm. Количината на одредени лекови се пресметува со помош на графикони за калибрација. Како референтен раствор се користи раствор од дијазотизиран р-анизидин во хлороводородна киселина. Пронајдокот обезбедува едноставен, брз и репродуктивен метод за квантитативно определување на лековите со дериват на имидазол. 7 бол., 1 ав.

Пронајдокот се однесува на сточарството, поточно на метод за проценка на здравствената состојба на младите говеда. Методот вклучува користење на животински влакна како дијагностички биолошки медиум, испитување на примероци од волна за 25 хемиски елементи и проценка на резултатите од студијата за елементарниот статус на волната на центилна скала. Со вредности во интервали од 10 до 24,9 центили и од 75,01 до 90 центили на центилната скала, состојбата на животното се оценува како нормална. Употребата на пронајдокот ќе ни овозможи да ги идентификуваме раните и скриените форми на нарушувања на здравјето на животните. 3 маси

Пронајдокот се однесува на екологијата, имено на метод за истовремено одредување на пестициди од различни хемиски класи во биолошки материјал. За да го направите ова, рибниот црн дроб се хомогенизира со безводен натриум сулфат и натриум хидроген цитрат, извлечен со ацетонитрил, протресен и таложен. Потоа, примероците се центрифугираат на 3000 вртежи во минута и се додаваат сорбенти - силика гел C-18, Bondesil-PSA и безводен натриум сулфат, по што се повторува центрифугирањето. Добиениот раствор се испарува, сувиот остаток се раствора во ацетонитрил и се анализира со помош на HPLC со УВ детектор. Пронајдокот овозможува да се процени нивото на контаминација со пестициди на биолошките објекти при мониторинг на животната средина. 2 бол., 4 ав.