Hodowla wirusów w hodowli komórkowej.
Komórki uzyskane z różnych narządów i tkanek ludzi, zwierząt, ptaków i innych obiekty biologiczne, są zdolne do namnażania się poza organizmem na sztucznych pożywkach w specjalnych pojemnikach laboratoryjnych (materacach, butelkach, probówkach itp.) Hodowle komórkowe z tkanek embrionalnych i zdegenerowanych złośliwie, które mają bardziej aktywne zdolności w porównaniu do normalnych komórek osoby dorosłej ciała, stały się powszechne, wzrost i rozmnażanie.W zależności od techniki przygotowania wyróżnia się trzy typy hodowli komórkowych:
· jednowarstwowe – ogniwa zdolne do przyczepiania się i namnażania na powierzchni chemicznie obojętnego szkła laboratoryjnego w formie monowarstwy;
Zawieszenie - komórki rozmnażające się w całej objętości pożywka przy ciągłym mieszaniu;
Ze względu na liczbę żywotnych pokoleń hodowle komórkowe dzielą się na:
· pierwotne, zdolne do reprodukcji jedynie w pierwszych pokoleniach, tj. w kilku pasażach po izolacji z tkanek;
· nadające się do szczepienia lub stabilne, zdolne do reprodukcji w warunkach laboratoryjnych w nieskończoność poprzez ciągłe pasażowanie;
· półprzeszczepialne, posiadające ograniczoną żywotność (40 - 50 pasaży).
Hodowle komórek zwierzęcych i ludzkich mają określone wymagania dotyczące fazy ciekłej (pożywka), gazowej (stężenie gazu) i stałej (powierzchnia podłoża). Przygotowując pożywki dla struktur komórkowych należy rozwiązać dwa trudne do pogodzenia problemy. Z jednej strony konieczne jest odtworzenie środowiska możliwie najbardziej zbliżonego do środowiska, w którym żyją komórki in vivo, z drugiej strony, aby stworzyć kontrolowane warunki standardowe, konieczna jest znajomość dokładnego składu środowiska .
Środowiska naturalne lub naturalne: Płyny jamiste (płyn owodniowy lub omoczniowy, ekstrakt zarodkowy, ekstrakty tkankowe, osocze lub surowica, GLA – hydrolizat laktoalbuminy – produkt enzymatycznej hydrolizy mleka) pozwalają rozwiązać tylko pierwszy problem. W pożywkach przygotowanych z oczyszczonych, ściśle określonych substancji warunki naturalne są odtwarzane tylko częściowo. Problemy te można łatwo rozwiązać podczas krótkotrwałej uprawy, gdy główną rolę odgrywają takie czynniki, jak ciśnienie osmotyczne, pH, stężenie innych jonów nieorganicznych, pojemność buforowa i skład atmosfery. Ciśnienie osmotyczne w komórce przy 37°≈7,6 atm.
Zmiany ciśnienia osmotycznego w granicach +-10% nie mają prawie żadnego wpływu na stan komórek, a ciśnienie utrzymuje się na normalnym poziomie, co osiągamy poprzez dodatek NaCl z uwzględnieniem innych jonów nieorganicznych i glukozy. Okazuje się, że jeśli wyjdziemy z potrzeby stabilnego ciśnienia osmotycznego, łatwiej jest zmienić stężenie białka niż niskocząsteczkowego, zwłaszcza związków nieorganicznych.
Optymalne pH – 7,2 – 7,4 kontrolowane jest przez układ buforowy symulujący układ buforowy krwi (NaHCO3 na słabym buforze fosforanowym).
Wymagane do przeżycia komórek in vitro jony nieorganiczne Na, Ca, Mn, Fe, CO2, PO4, SO4. Ich rola nie jest w pełni poznana, ale są niezbędne do utrzymania ciśnienia osmotycznego, przyczepienia komórek do szkła i aktywności enzymów. Dlatego podstawą każdej pożywki jest zrównoważone ciśnienie osmotyczne, pH itp. roztwór soli.
Do przygotowania pożywek powszechnie stosuje się roztwory soli fizjologicznej Earle'a i Hanksa. Roztwory te, takie jak sól fizjologiczna buforowana fosforanami Dulbecco i Vogta, są również stosowane do nawadniania i przemywania komórek podczas pasażu hodowli, izolacji linii komórkowych i innych manipulacji z kulturami komórkowymi.
Roztwory soli Earle'a i Hanksa o dużej pojemności buforowej co najmniej 3 ml (roztwór soli Hanksa Ca Mg K Na - fosfor, sole siarkowe kwasy solne, D-glukoza, czerwień fenolowa; Erla – uboższa) + surowica, płyn owodniowy, ekstrakty zarodkowe, ekstrakt drożdżowy. Zakresy pH i osmolalności, w których zachodzi proliferacja komórek, są wąskie i różnią się w zależności od typu komórki. Aby utrzymać pH, większość mediów wykorzystuje bufor wodorowęglanowy: HCO3 = CO2 + OH, w przypadku uwolnienia dwutlenku węgla wzrasta stężenie OH. Roztwory mogą zawierać niewielkie ilości buforu wodorowęglanowego (roztwór Hanka) i przeznaczone są do utrzymywania pH w szczelnie zamkniętych pojemnikach. Inne (roztwór Earla) zawierają więcej wodorowęglanów i są stosowane w układach o podwyższonym ciśnieniu cząstkowym CO2. Jeżeli kultury trzymane są poza inkubatorem CO2, gdzie utrzymanie pH jest trudniejsze, potrzebne są alternatywne systemy buforowe. Dobrym buforem jest kwas 4-(2-hydroksyetylo)1-piperazynoetanosulfonowy HEPES. Do pożywek dodawane są wskaźniki w celu kontrolowania kwasowości pożywki w dowolnym momencie. Podczas wzrostu komórki zakwaszają podłoże, a wskaźnik przybiera barwę żółto-pomarańczową.
Pożywki syntetyczne, standardowe: pożywka 199, pożywka Eagle i jej modyfikacje, pożywka RPMI1-1640, zawierają wiele składników niezbędnych do rozwoju komórek: aminokwasy (10 niezbędnych oraz cystynę i tyrozynę, wiele komórek potrzebuje glutaminy), witaminy rozpuszczalne w wodzie, zwłaszcza z grupy B , synteza koenzymów ATP, choliny i inozytolu, pełniących rolę substratu węglowodorowego. Nośniki bazują na rozwiązaniach firmy Earle lub Hanks. Stosowane są jako podłoża pomocnicze dla komórek pierwotnych oraz do hodowli limfocytów i komórek krwiotwórczych.
Normalny, utrzymujący się określone funkcje komórki na standardowym podłożu nie rozmnażają się (chyba że zostaną przekształcone). Aby uzyskać optymalny wzrost komórek, zwykle dodaje się 5–20% surowicy płodowej.
Serum to niezwykle złożona mieszanina małych i dużych cząsteczek, które mogą zarówno promować, jak i hamować wzrost komórek. Do głównych funkcji serum zalicza się: dostarczanie czynników hormonalnych stymulujących wzrost komórek i ich funkcje; dostarczanie czynników przyłączania i rozprzestrzeniania się komórek; dostarczanie białek transportowych przenoszących hormony, minerały, lipidy itp. Białka surowicy bezpośrednio i specyficznie zaangażowane w stymulację podziału komórek nazywane są czynnikami wzrostu.
Większość czynników wzrostu występuje w surowicy w stężeniach kilku nanogramów na mililitr lub mniejszych. Niektóre z tych czynników są specyficzne dla komórek znajdujących się na pewnym etapie różnicowania, działanie innych nie ogranicza się do jednego typu komórek. Ten sam typ komórek może być stymulowany przez różne czynniki wzrostu. Na przykład fibroblasty proliferują w odpowiedzi na czynnik wzrostu fibroblastów, naskórkowy czynnik wzrostu, płytkopochodny czynnik wzrostu i somatomedyny. Wszystkie te substancje są mitogenami (stymulują mitozę). Innym ważnym czynnikiem wzrostu dla prawie wszystkich typów komórek jest hormon insulina. Z pozostałych hormonów najczęściej stosowane są glukokortykoidy (hydrokortyzon, deksametazon), steroidy (estradiol, testosteron, progesteron) i hormony tarczycy (trójjodotyronina). Hormony stymulują lub hamują wzrost w zależności od rodzaju komórek i ich gęstości. Na przykład glukokortykoidy wpływają na proliferację komórek, zmieniając ich wrażliwość na czynniki wzrostu.
Do transportu czynników niskocząsteczkowych (witaminy, aminokwasy, lipidy i inne) potrzebne są białka transportowe. Albumina pełni tę rolę. Transport żelaza zapewnia transferyna, a powierzchnia większości hodowanych komórek zawiera receptory dla tego białka. Czynniki przyłączania i rozprzestrzeniania się komórek obejmują kolagen i fibronektynę, bardziej wyspecjalizowane są chondronektyna (adhezja chondrocytów) i laminina (adhezja komórek nabłonkowych).
(J.N. Hanks)
Izotoniczny buforowany roztwór soli stosowany w wirusologii.
Zobacz wartość Roztwór soli fizjologicznej Hanksa w innych słownikach
solny przym.— 1. Znaczenie korelacyjne. z rzeczownikiem: sól (1*1,4), z nim związanym. 2. Związany z wydobyciem i produkcją soli, ze złożami i wpływem soli na coś.
Słownik wyjaśniający autorstwa Efremowej
Rozwiązanie- rozwiązanie, m. 1. Kąt utworzony przez rozłożone ostrza nożyczek, nóżki kompasu itp. (rozłożony). kompas. Wąskie rozwiązanie. 2. Dziura powstająca po otwarciu małża............
Słownik wyjaśniający Uszakowa
Solankowy- sól fizjologiczna, sól fizjologiczna (specjalna). Przym., w znaczeniu związane z wydobyciem i produkcją soli, z osadami i wpływem soli na coś. Plamy soli na skórze. sklep.
Słownik wyjaśniający Uszakowa
Solankowy- patrz Sól.
Słownik wyjaśniający Kuzniecowa
Agar żółtkowo-solny— (ZhSA) jest podłożem selektywnym dla gronkowców. Wysoka zawartość chlorku sodu hamuje większość bakterii występujących w związku ze gronkowcami, a obecność......
Słownik mikrobiologii
Roztwór izotoniczny- roztwór mający takie samo ciśnienie osmotyczne jak roztwór porównywany.
Słownik mikrobiologii
Rozwiązanie Lugola- barwnik zawierający 1 g jodu metalicznego i 2–5 g jodku potasu na 3° ml wody destylowanej. Stosowany do różnicowego barwienia bakterii metodą Grama, do......
Słownik mikrobiologii
Rozwiązanie Olsvery— roztwór przeznaczony do konserwacji czerwonych krwinek. Składniki: 24,6 g glukozy, 9,6 g cytrynianu sodu, 5,04 g chlorku sodu, 1200 ml destylatu. woda. Sterylizować przez filtrację. Dla zachowania............
Słownik mikrobiologii
Rozwiązanie Ringera- składa się z 0,9 g chlorku sodu, 0,042 g chlorku potasu, 0,02 g wodorowęglanu sodu, 100 ml destylatu. woda. W mikrobiologii stosowany jest jako rozcieńczalnik i środek konserwujący.
Słownik mikrobiologii
Solankowy- izotoniczny do każdego naturalnego podłoża roztwór soli. W praktyce lekarskiej m.in. w mikrobiologii pod kierunkiem F.R. często rozumiane 0,85 -0,9% roztwór sodu chlorek Jeden z najbardziej.......
Słownik mikrobiologii
Bilans wodno-solny- stosunek ilości wody i soli wprowadzonych do organizmu i wydalonych z organizmu.
Duży słownik medyczny
Reżim wodno-solny— dieta normalizująca spożycie wody i soli mineralnych w zależności od aktywności fizycznej, warunków klimatycznych itp.
Duży słownik medyczny
Rozwiązanie Gayema- (G. Hayem, 1841-1933, lekarz francuski) płyn do rozcieńczania czerwonych krwinek u melanżerów przed ich zliczeniem, czyli roztwór wodny chlorek rtęci (0,25%), siarczan sodu (2,5%) i chlorek sodu (0,5%).
Duży słownik medyczny
Rozwiązanie hipertoniczne- (solutio hypertonica) roztwór, którego ciśnienie osmotyczne jest wyższe od normalnego ciśnienia osmotycznego osocza krwi; w medycynie stosuje się 3-10% wodne roztwory chlorku sodu,......
Duży słownik medyczny
Roztwór hipotoniczny- (solutio hipotonica) roztwór, którego ciśnienie osmotyczne jest niższe niż normalne ciśnienie osmotyczne osocza krwi.
Duży słownik medyczny
Rozwiązanie błotne- płyn część borowina lecznicza zawierająca sole, materia organiczna i gazy.
Duży słownik medyczny
Roztwór buforowy- , roztwór, do którego można dodać umiarkowaną ilość mocny kwas lub mocną zasadą bez znaczących zmian w pH (kwasowości lub zasadowości). Zazwyczaj........
Roztwór wodny- roztwór, w którym woda pełni rolę środka rozpuszczającego. Woda rozpuszcza wiele substancji spolaryzowanych, czyli związki JONOWE i KOWALENTNE z dipolami molekularnymi......
Naukowe i techniczne słownik encyklopedyczny
Cukrzyca Sól Nerka- patrz Pseudohipoaldosteronizm.
Duży słownik medyczny
Roztwór do dializy- roztwór stosowany w praktyce klinicznej do dializ, w tym do hemodializy; w tym drugim przypadku zawierają zasadowe elektrolity w stężeniu zbliżonym do ich stężenia w osoczu krwi.
Duży słownik medyczny
Diureza, sól fizjologiczna— (d. salina) zwiększone D. wraz ze wzrostem stężenia soli w moczu.
Duży słownik medyczny
Roztwór nasycony-, w chemii, - ROZTWÓR zawierający taką ilość rozpuszczonego związku, że większa ilość w danej temperaturze i ciśnieniu nie rozpuści się, z wyjątkiem......
Naukowy i techniczny słownik encyklopedyczny
Rozwiązanie polarne— , ROZWIĄZANIE, w którym cząsteczki rozpuszczalnika (na przykład wody) mają momenty dipolowe. Tworzą się w tym przypadku kompleksy rozpuszczalników i substancji rozpuszczonych, co przyczynia się do......
Naukowy i techniczny słownik encyklopedyczny
Rozwiązanie- w chemii - ciecz (ITEL) zawierająca inną substancję (ENNOE). W przeciwieństwie do mieszanin, roztwór zawiera dwa lub więcej oddzielnych związki chemiczne nie da się podzielić.......
Naukowy i techniczny słownik encyklopedyczny
Roztwór izoosmotyczny- (izo- + osmoza) patrz Roztwór izotoniczny.
Duży słownik medyczny
Roztwór izotoniczny- (solutio isotonica; synonim roztwór izoosmotyczny) w medycynie roztwór, którego ciśnienie osmotyczne jest równe ciśnieniu osmotycznemu osocza krwi (na przykład 0,9% wodny roztwór chlorku......
Duży słownik medyczny
Mieszanka budowlana— w budownictwie: substancja stosowana do spajania cegieł, kamieni, płytek lub bloków betonowych w konstrukcję. Nowoczesna zaprawa składa się z mieszanki......
Naukowy i techniczny słownik encyklopedyczny
Rozwiązanie Lugola- (J. G. A. Lugol, 1786-1851, lekarz francuski) roztwór zawierający jod, jodek potasu i wodę w stosunku 1: 2: 17; stosowany w badaniach laboratoryjnych i jako lek.
Duży słownik medyczny
Roztwór maści- (unguentum-solutio) maść otrzymywana poprzez rozpuszczenie substancji leczniczych w bazie maści.
Duży słownik medyczny
Wymiana woda-sól- rodzaj tlenu, obejmujący procesy wnikania, przemian w organizmie i uwalniania wody i soli mineralnych.
Duży słownik medyczny
Zbilansowany roztwór soli (BSS) zawiera sole nieorganiczne. Ponadto może zawierać wodorowęglan sodu i, w niektórych przypadkach, glukozę. Skład niektórych najczęściej stosowanych zrównoważonych roztworów soli przedstawiono w tabeli. 9.2. Jeśli to konieczne, do tych roztworów można dodać bufor HEPES (5-20 mM), usuwając jednocześnie równoważną ilość NaCl w celu utrzymania ciśnienia osmotycznego. Wiele kompletnych środowisk i dostawców środowisk opiera się na BSS, które
Niektórzy sprzedający podłoże MEM Needle z solami Hanksa lub Eagle MEM z solami Earla wskazują, jaki skład BSS został użyty do przygotowania podłoża. Sole Hanksa stosuje się podczas hodowli komórek w zamkniętych kolbach w atmosferze powietrza, natomiast sole Earle'a stosuje się przy wysokim stężeniu wodorowęglanu w połączeniu z 5% CO2 w fazie gazowej.
BSS stosuje się także do rozcieńczania koncentratów aminokwasów i witamin przy przygotowywaniu pożywek hodowlanych, do płukanek lub preparatów izotonicznych oraz do krótkotrwałej inkubacji komórek (do 4 godzin, zwykle z dodatkiem glukozy). Skład BSS jest często modyfikowany — na przykład poprzez eliminację glukozy lub czerwieni fenolowej z BSS Hanksa lub eliminację jonów Ca2+ i Mg2+ z PBS Dulbecco. PBS bez Ca2+ i Mg2+ jest znany jako roztwór PBS A, a w całej książce będzie używane oznaczenie D-PBSA w celu wskazania braku tych dwuwartościowych kationów. Modyfikację należy zawsze określić przy zakupie BSS oraz w publikacjach i raportach.
Wybór BSS zależy zarówno od ciśnienia parcjalnego CO2 (patrz rozdział 9.2.2 oraz tabele 9.1 i 9.2), jak i od celów badacza. Jeżeli BSS stosuje się jako roztwór do dezagregacji jednowarstwowych tkanek lub komórek, zwykle wyklucza się Ca2+ i Mg2+, tak jak w przypadku soli fizjologicznej niezawierającej wapnia i magnezu (CMF) lub D-PBSA firmy Moscona (patrz tabela 9.2). Wybór BSS zależy również od tego, czy roztwór będzie stosowany do hodowli zawiesinowej, czy jednowarstwowej (przyłączonej) hodowli komórkowej. S-MEM firmy Eagle na bazie soli fizjologicznej, zmodyfikowany przez Spinner, jest odmianą minimalnej pożywki firmy Eagle o obniżonej zawartości Ca2+ w celu ograniczenia agregacji i przyłączania komórek (patrz Tabela 9.2).
HBSS, EBSS i PBS jako bufory na bazie fosforanów mają niską zdolność buforowania w fizjologicznym pH. Paul zaproponował BSS buforowany Tris, który jest bardziej skuteczny jako bufor, ale wymaga dostosowania do niektórych typów komórek. Za najskuteczniejsze bufory uważa się obecnie HEPES (10-20 mM) w zakresie pH 7,2-7,8 oraz Tricine w zakresie pH 7,4-8,0, jednak stosowanie tych buforów na dużą skalę znacznie zwiększa koszty badań.
- Szczepienia (łac. immunis free, wolne od czegoś; synonim: immunoprofilaktyka, szczepienia zapobiegawcze, szczepienia zapobiegawcze) to specyficzna profilaktyka chorób zakaźnych ludzi i zwierząt. Immunoprofilaktyka szeregu chorób zakaźnych drogą kropelkową...
Wiadomości na temat roztworu soli Hanksa
- G.V. Pavlov, N.V. Nikitina Publikacja naukowa, Jekaterynburg, 2003 Wprowadzenie Wiele dziedzin medycyny teoretycznej i praktycznej, w mniejszym lub większym stopniu związanych z funkcjonowaniem układu narządów i tkanek zewnątrzwydzielniczych w stanach normalnych i patologicznych, osiągnęło w ostatnich dziesięcioleciach wysoki poziom
- Członek korespondent RAMS, profesor I.I. Balabolkin, doktor nauk medycznych L.S. Namazova, dr. I.V. Sidorenko, profesor I.S. Elkis, dr. AV Topolyansky, profesor A.L. Vertkin Naukowe Centrum Zdrowia Dzieci Rosyjskiej Akademii Nauk Medycznych, Moskwa MMA imienia I.M. Sechenov MGMSU nazwany na cześć. NA. Stacja Medycyny Ratunkowej i Ratownictwa Semashko
Dyskusja Hanksa na temat roztworu soli
- Nic nie rozumiem! Od miesiąca jem „izotonik” – minimum tłuszczu, słodyczy, bilans białek i węglowodanów, a od trzeciego tygodnia co drugi dzień ćwiczę modelowanie. Na wadze - jak było (od 58 do 60 przy wzroście 1,58 budowy normostenicznej), na centymetrze - te same objętości, cóż, może zniknęło kilka centymetrów
- chlorowodorek sodu Wodny (0,9%) roztwór chlorku sodu. Środek zastępujący plazmę. Jego inna nazwa to izotoniczny roztwór chlorku sodu do wstrzykiwań. Farmakologia. Izotoniczny roztwór chlorku sodu uzupełnia niedobory sodu
